高效液相色譜法:
根據(jù)國標《GB 5413.37—2010》食品安全國家標準乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定
實驗用前處理:
實驗儀器和好耗材包括:
恒溫水浴鍋 溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml 高速勻質器 黃曲霉毒素免疫M1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機 定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管
實驗用試劑:色譜乙腈 色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等
HPLC條件:
高效液相色譜儀 |
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色譜柱 |
C18柱,150*4.6mm,5um |
流動相 |
乙腈-水(25:75) |
熒光檢測器: |
激發(fā)波長365nm,發(fā)射波長435nm; |
柱 溫 |
室溫 |
流速 |
1.0ml/min |
進樣量 |
20ul |
出峰時間 |
10分鐘左右 |
樣品取樣:真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程,所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。
樣品前處理:不同樣品
牛奶 水浴加熱至40度,離心用上清液過柱凈化;
乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品:稱取適量奶粉樣品,用于蒸餾水中,混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型):稱取適量奶粉樣品,用于蒸餾水中,調節(jié)PH值至微堿性,高速均質器勻漿,水浴加熱后離心,取上清液混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
干酪:稱取適量切細或粉碎,過篩用加純水溶解,高速均質器勻漿,超聲提取后收集上清液,然后用石油醚進行兩次萃取,然后用適宜的有機溶液萃取,取若干上清液過柱凈化
奶粉樣品,用于蒸餾水溶解中,調節(jié)PH值至微堿性,水浴加熱后離心,取上清液混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
奶油:稱取適量加甲醇水溶解,震蕩后分頁漏斗取下層溶液,蒸干后溶于水用于過柱凈化。
免疫柱凈化步驟:完全符合GB/T 18980-2003
┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復至室溫,將上方塞子取出斜剪斷,再插回親和柱上。
┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準確移取清澈液注入玻璃注射器;
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;
┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接,在注射器中加入10ml水,調節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
┅┅準確加入4mL色譜級乙腈洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測。
注:收集管中的洗脫液即為純化后的樣品,可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。
HPLC 檢測需要儀器與耗材
產品名稱 |
說明 |
黃曲霉毒素M1固體標準品 |
參比對照使用 |
黃曲霉毒素M1液體標準品 |
濃度0.5ug/ml, 溶于乙腈 |
PriboFast 黃曲霉素M1免疫親和柱 |
用于 樣品前處理柱 分析黃曲霉素 |
PriboFast泵流操作架(8位) |
用于免疫親和柱凈化樣品處理,方便控制流速 |
黃曲霉毒素檢測專用玻璃纖維濾紙 |
用于去除HPLC檢測時部分雜峰,有效提高靈敏度。110,1.5um |
不銹鋼均質器 |
高速勻漿樣品,有效提高萃取效率 |
旋轉蒸發(fā)儀-超聲波發(fā)生器等配套設備 |
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酶聯(lián)免疫檢測法:符合國家標準
酶聯(lián)免疫檢測法采用競爭ELISA,在微孔板上預包被黃曲霉毒素B1抗原,加入樣本(或黃曲霉毒素M1標準品溶液)及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素M1與預包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。未結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液,讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負相關。對照標準曲線,即可得出相應殘留物黃曲霉毒素M1的含量。
樣品處理
牛奶:直接離心取上清液用于檢測
奶粉及其他固狀奶制品:需要溶解于去離子水中,離心取上清液用于檢測
試劑盒檢測時間:30分鐘+30分鐘
交叉反應率:
Aflatoxin M1 |
100% |
Aflatoxin B1 |
8% |
Aflatoxin B2 |
10% |
Aflatoxin G1 |
7% |
Aflatoxin G2 |
5% |
ELISA 方法檢測需要:
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說明 |
PriboFast 黃曲霉毒素M1酶聯(lián)免疫檢測試劑盒 |
96T 檢測范圍 (0.1 ppb -8.1ppb) |
移液器(彩色) |
多個量程:0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul |
八道半支滅菌移液器 |
量程: 5-50ul; 50-300ul |
酶標儀等 |
進口、國產儀器, |
PriboFast試劑盒采用直接競爭法,檢測時間短,步驟簡單,性能穩(wěn)定,檢測限符合國標要求。
對分析人員要求:
化學分析儀器及其相關專業(yè)或有高效液相色譜儀操作經驗的人員均可很快掌握黃曲霉毒素M1檢測技術。我公司提供相關的技術培訓和售后技術服務。
敬請來電咨詢:
技術與售后請聯(lián)系:
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