日期 |
時間 |
培訓內(nèi)容 |
授課老師 |
1月19日 |
9:30-20:00 |
培訓報到 |
劉剛博士
2008年博士畢業(yè)于中國科學院上海生命科學研究院,從事腫瘤干細胞,細胞衰老,腫瘤轉(zhuǎn)移等細胞作用網(wǎng)絡和通路的研究,并作為骨干研究人員參加了973計劃項目、國家自然科學基金重點項目、在香港中文大學做為作為Postdoc和Research fellow,從事研究工作。先后Nature Genetics,cell research、PLOS one等期刊發(fā)表論文十余篇。 |
1月20日 |
9:00-11:30 |
理論講解:
一、基因編輯技術(shù)簡介
1.ZFN 2.TALEN 3.CRISPR
二、CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)
1.guide RNA序列設(shè)計
2.靶基因序列查找
3.sgRNA在線設(shè)計、特異性分析和效率驗證
4.不同物種sgRNA設(shè)計
實驗操作:
一、CRISPR/Cas9基因表達載體克隆構(gòu)建
1.sgRNA設(shè)計合成
2.敲除載體選擇及線性化
3.sgRNA連接,轉(zhuǎn)化等 | |
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13:00-17:00 |
理論講解:
一、CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染策略
1.生物轉(zhuǎn)染 2.物理轉(zhuǎn)染 3.化學轉(zhuǎn)染 4.篩選策略選擇
二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,電轉(zhuǎn),病毒轉(zhuǎn)導,顯微注射等)
三、Crispr/Cas9轉(zhuǎn)染策略(植物,動物,原核生物)
四、CRISPR/Cas9病毒系統(tǒng)選擇
實驗操作:CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒轉(zhuǎn)染靶細胞 | |
1月21日 |
9:00-11:30 |
理論講解:
一、CRISPR技術(shù)應用解析
1.基因敲除2.基因敲入3.CRISPR在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的應用4.CRISPR靶基因標記定位5.基因敲除小鼠模型構(gòu)建策略
二、CRISPR案例解析
1.基因敲除小鼠模型構(gòu)建2.植物基因敲除應用3.細菌,真菌等基因敲除應用
三、Cripr基因脫靶分析及解決方案
四、Crispr/Cas9與siRNA、shRNA
實驗操作:
1.CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染后靶DNA檢測
2.靶基因修飾位點擴增及鑒定 | |
13:00-17:00 |
理論講解:
一、單堿基基因編輯技術(shù)
1.HF2-BE2 2.BE3系統(tǒng) 3.ABE系統(tǒng)。
二、CRISPR-Cpf1系統(tǒng)介紹
三、CRISPR-C2c2系統(tǒng)介紹
四、多靶點sgRNA載體構(gòu)建策略
五、Crispr/Cas9系統(tǒng)在腫瘤和遺傳病治療中應用解析
實驗操作:
1. CRISPR基因敲除效果檢測 |