MaxCyte流式電轉(zhuǎn)系統(tǒng)助力HIV功能性治愈研究獲新進(jìn)展

近期，賓夕法尼亞大學(xué)的James Riley課題組和Sangamo公司共同公布了一項(xiàng)用于HIV治愈的I期臨床試驗(yàn)成果，結(jié)果喜人。該研究試驗(yàn)利用Maxcyte GT臨床級(jí)流式電轉(zhuǎn)系統(tǒng)對(duì)HIV患者CD4 T細(xì)胞CCR5基因編輯并回輸，以確定這些T細(xì)胞如何更好地實(shí)現(xiàn)HIV治愈策略。該結(jié)果近期已發(fā)表在The Journal of Clinical Investigation雜志上。論文標(biāo)題為：CCR5-edited CD4 Tcells augment HIV-specific immunity to enable post rebound control of HIV replication.

 

研究目的：本次臨床試驗(yàn)探討了鋅指核酸酶（ZFN）體外遞送的方法，CCR5Δ32雜合子是否優(yōu)先受益，CCR5基因編輯的CD4 T細(xì)胞對(duì)HIV特異性T細(xì)胞應(yīng)答的影響以及注入的CCR5基因編輯T細(xì)胞在分析治療中斷期間延遲病毒反彈的能力。

研究方法：本試驗(yàn)采用電轉(zhuǎn)與鋅指核酸酶（ZFN）結(jié)合的體外傳遞方法，首先獲取自體外周血淋巴細(xì)胞，分離并富集CD4+細(xì)胞。利用MaxCyte-GT^TM流式轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，在封閉系統(tǒng)中用ZFN-mRNAs對(duì)CD4+T細(xì)胞進(jìn)行電穿染，對(duì)轉(zhuǎn)染后的CD4+T細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增。研究招募了14名HIV感染者，他們的病毒載量通過(guò)抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（ART）得到了很好的控制。研究測(cè)量了停藥后病毒反彈的時(shí)間，CCR5編輯的CD4 T細(xì)胞的持久性以及回輸100億個(gè)CCR5基因編輯的CD4 T細(xì)胞是否增強(qiáng)了HIV特異性免疫反應(yīng)。在完成細(xì)胞回輸后，參與患者進(jìn)行試驗(yàn)性停藥。

 

研究時(shí)間線和樣本采集點(diǎn)的示圖

研究結(jié)果：這項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)回輸CD4 T細(xì)胞耐受性良好，沒(méi)有嚴(yán)重的不良事件。HIV功能性治愈的金標(biāo)準(zhǔn)是試驗(yàn)性停藥后病毒反彈時(shí)間推遲。與歷史對(duì)照相比，觀察到病毒反彈時(shí)間略有延遲；14個(gè)人中有3個(gè)人，似乎在最終反彈之前恢復(fù)了對(duì)病毒血癥的控制（其中2個(gè)為CCR5Δ32雜合子）。

值得一提的是，只有這些個(gè)體的HIV特異性CD8 T細(xì)胞反應(yīng)顯著恢復(fù)。在后期病毒反彈時(shí)，觀察到病毒對(duì)其中一種重新激活反應(yīng)的免疫逃逸，這說(shuō)明病毒控制和增強(qiáng)的CD8 T細(xì)胞應(yīng)答之間存在直接聯(lián)系。

這項(xiàng)臨床研究表明，CCR5基因編輯的CD4 T細(xì)胞回輸可以通過(guò)增強(qiáng)已存在的HIV特異性免疫應(yīng)答，來(lái)幫助實(shí)現(xiàn)HIV功能性治愈。

治療中斷期間病毒反彈時(shí)間

Sangamo利用MaxCyte電轉(zhuǎn)平臺(tái)開展多項(xiàng)HIV治療研究項(xiàng)目
Sangamo是一家全球領(lǐng)先的基因治療公司，已經(jīng)與Maxcyte開展了廣泛的合作，利用Maxcyte流式電轉(zhuǎn)平臺(tái)進(jìn)行多個(gè)臨床項(xiàng)目的研發(fā)，尤其是在HIV治療領(lǐng)域。2016年Sangamo公司聯(lián)合美國(guó)多所實(shí)驗(yàn)室利用在基因編輯中利用Maxcyte電轉(zhuǎn)技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)CCR5基因在人體造血干細(xì)胞中的敲除，結(jié)果表明有效的雙等位基因CCR5敲除效率達(dá)到72.9%，經(jīng)過(guò)清洗、標(biāo)記、CD34篩選以及電轉(zhuǎn)后的總回收率達(dá)70%，并在臨床前體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中都表現(xiàn)出了CCR5基因敲除的可行性和安全性（詳見(jiàn)參考文獻(xiàn)2）。
 
Maxcyte利性的非病毒細(xì)胞工程平臺(tái)-流式電轉(zhuǎn)技術(shù)平臺(tái)，為全球生物醫(yī)藥行業(yè)的合作伙伴賦能，幫助客戶開發(fā)創(chuàng)新性的細(xì)胞療法，來(lái)滿足病人對(duì)先進(jìn)細(xì)胞療法的需求。利用Maxcyte ExPERT電轉(zhuǎn)平臺(tái)結(jié)合基因編輯手段安全高效可高度重復(fù)地對(duì)人體原代細(xì)胞進(jìn)行遺傳改造，在符合臨床使用的嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)前提下，用于治療遺傳性疾病和癌癥。Maxcyte具有全球技術(shù)支持網(wǎng)絡(luò)，目標(biāo)是幫助合作伙伴釋放它們產(chǎn)品的所有潛能。

Maxcyte已被全球范圍內(nèi)用戶認(rèn)可，全球前十制藥公司都采用Maxcyte技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行藥物研發(fā)，歐美主要基因編輯和細(xì)胞治療公司與Maxcyte合作進(jìn)行新型的基因和細(xì)胞治療產(chǎn)品開發(fā)，如Allogene therapeutics，Editas medicine，CRISPR Therapeutics，Precision biosciences和Kite pharma等。多個(gè)頂級(jí)學(xué)術(shù)研究機(jī)構(gòu)采用Maxcyte技術(shù)研究哺乳動(dòng)物細(xì)胞和干細(xì)胞， 如日本京都大學(xué)iPS細(xì)胞研究所（CIRA）和美國(guó)賓夕法尼亞大學(xué)。

[1] Pablo Tebas, Carl H. June, James L. Riley, et al. CCR5-edited CD4 T cells augment HIV-specific immunity to enable post rebound control of HIV replication[J]. J Clin Invest. 2021.
[2] Digiusto D L, Cannon P M, Holmes M C, et al. Preclinical development and qualification of ZFN-mediated CCR5 disruption in human hematopoietic stem/progenitor cells[J]. Molecular Therapy Methods & Clinical Development, 2016, 3(C):16067.