武漢英科小反芻獸疫酶聯(lián)免疫快速檢測試劑盒開發(fā)成功

瀏覽次數(shù)：8837　發(fā)布日期：2015-3-17　來源：本站　本站原創(chuàng)，轉(zhuǎn)載請注明出處

武漢英科生物技術(shù)有限公司科研人員經(jīng)過近一年研發(fā)，開發(fā)出小反芻獸疫酶聯(lián)免疫快速檢測試劑盒，該產(chǎn)品可以應(yīng)用于檢測牛、羊血清中小反芻獸疫病毒抗體，快速、準(zhǔn)確、特異性強。

小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）俗稱羊瘟，又名小反芻獸假性牛瘟（pseudorinderpest）、肺腸炎（pneumoenteritis）、口炎肺腸炎復(fù)合癥（stomatitis-pneumoenteritis complex），是由小反芻獸疫病毒引起的一種急性病毒性傳染病，主要感染小反芻動物，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征。

將純化的Bacmid-PPRV-N重組蛋白為抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的致敏脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞在PEG作用下融合,經(jīng)克隆培養(yǎng)和間接ELISA方法篩選,獲得了2株能穩(wěn)定分泌抗小反芻獸疫病毒N蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為5B11和3H10-3B8。生物學(xué)特性鑒定試驗表明：5B11和3H10-3B8抗體類型和亞類均為IgG2b；5B11單抗腹水的效價達(dá)1：819200,3H10-3B8達(dá)1：12800；血清學(xué)試驗證明2株單抗均能與Bacmid-PPRV-N重組蛋白抗原結(jié)合,具有高度的特異性；相加ELISA試驗結(jié)果顯示,5B11和3H10-3B82株單克隆抗體分別識別N蛋白上不同的抗原位點；2株雜交瘤細(xì)胞的染色體均為99-104。以Bacmid-PPRV-N重組蛋白和用親和層析純化的單抗5B11建立了小反芻獸疫病毒C-ELISA抗體檢測方法。通過檢測已知為PPRV抗體陽性和陰性的血清對該方法進(jìn)行條件優(yōu)化,最終確定抗原用碳酸鹽緩沖液以1：1000稀釋后包被酶標(biāo)板,于37℃條件下震蕩反應(yīng),以含0.5%BSA和0.05%Tween-20的PBS作為稀釋液,稀釋血清至1：10、單抗至0.17ng/孔的終濃度后一起加到酶標(biāo)板,使單抗與血清中的PPRV抗體競爭結(jié)合N抗原特異性表位,檢測結(jié)果的臨界值通過92份已知為PPRV抗體陰性血清的抑制率分布來確定,最終將臨界值確定為50,即92份陰性血清的PI均值加上3倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差。基于上述研究成果,先后組裝了3個批次的試劑盒。

在試劑盒的初步應(yīng)用中,將自制的試劑盒與國際通用的標(biāo)準(zhǔn)試劑盒(CIRAD-BIOS PPRV rC-ELISA試劑盒)進(jìn)行比較分析,對自制的PPRV C-ELISA抗體檢測試劑盒的使用價值進(jìn)行了評估。通過對977份臨床樣品進(jìn)行檢測,結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計分析表明：自制的試劑盒與參考試劑盒的符合率為99.38%,說明自制的PPRVC-ELISA抗體檢測試劑盒可用于PPR臨床檢測。

小反芻獸疫ELISA 檢測試劑盒 Peste des Petits Ruminants Ab ELISA kit

規(guī)格： 96檢測/盒

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