全自動Western新冠多抗原血清學(xué)檢測試劑盒上市

對SARS-CoV-2患者免疫反應(yīng)的表征，是了解COVID-19疾病進展或者疫苗功效的關(guān)鍵。SARS-CoV-2抗原例如刺突蛋白（Spike Protein），S1和S2亞基，S1受體結(jié)合域（S1 RBD）以及病毒核衣殼蛋白（Nucleocapsid Protein）均可以刺激機體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，產(chǎn)生相應(yīng)抗體。因此，不同抗原的反應(yīng)性可能揭示了疾病進展的不同階段。例如，與核衣殼的反應(yīng)性可能是病毒早期感染的敏感性指標(biāo)，而與S1 RBD和刺突蛋白的其他部分的反應(yīng)性可能與病毒的中和有關(guān)。

血清學(xué)免疫檢測的常見方法是酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法。但這種方法會面臨：

• 每個孔只檢測一個抗原，所以提供針對SARS-CoV-2的復(fù)雜免疫學(xué)信息受限；

• 因為抗原信息提供有限，容易產(chǎn)生假陽性；

• 手動操作時間長，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性較差。

   

為了克服這些局限，

全自動Western多抗原血清學(xué)檢測試劑盒已上市！！

全自動Western多抗原血清學(xué)檢測試劑盒的特點：

• 一份樣品可檢測5個抗原血清反應(yīng)性指標(biāo)：刺突蛋白（Spike Protein）、S1亞基、S2亞基、S1受體結(jié)合域（S1 RBD）、病毒核衣殼蛋白（Nucleocapsid Protein）；

• 提供5個抗原的分子量信息，且不影響靈敏度；

• 通過相對峰面積定量抗原反應(yīng)性，提供SARS-CoV-2病人的復(fù)雜免疫學(xué)反應(yīng)信息；

• 血清樣品量可低至1μl；

• 全自動Western，無人為操作誤差；

• 檢測速度快，3小時出結(jié)果。

   

檢測原理：

應(yīng)用舉例：

一份樣品提供多種抗原信息

為了測試血清樣品對這些抗原的反應(yīng)性，對聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）確認(rèn)為COVID-19陽性的4位患者的血清樣品以及2份陰性樣品進行全自動Western的血清學(xué)檢測。結(jié)果顯示，PCR陽性血清樣品與試劑盒中包含的抗原具有高度反應(yīng)性，PCR陰性血清樣品沒有反應(yīng)性發(fā)生。其中PCR陽性3號樣品中，可以顯示出該血清樣本對5個抗原（刺突蛋白（Spike Protein）、S1亞基、S2亞基、S1受體結(jié)合域（S1 RBD）、病毒核衣殼蛋白（Nucleocapsid Protein））均有反應(yīng)性。

一份樣本提供多種體液免疫學(xué)表征

當(dāng)對相對峰面積進行定量時，結(jié)果顯示了與患者血清樣品中的5種抗原中的每一種的IgG反應(yīng)性的高度可變性。例如，患者4的血清樣本與核衣殼的反應(yīng)性高（占總峰面積的68％）。而患者1、2、3的血清樣本與核衣殼的反應(yīng)性低得多（分別為7％，3％和34％），但與Spike蛋白反應(yīng)性增加。這預(yù)示著患者4血清樣本中顯示其對早期感染的指標(biāo)敏感，而患者1、2和3的血清樣本中可能已產(chǎn)生與靶向刺突蛋白上的表位相結(jié)合的中和抗體。

良好的稀釋線性

對PCR陽性血清樣品從1：40到1：138240進行稀釋系列，一式兩份，并使用SARS-CoV-2多抗原血清學(xué)檢測模塊進行分析。結(jié)果顯示，信號隨著血清樣品濃度的降低而降低（圖A-C），并且該測定法顯示出良好的線性，在3.5 log滴定系列中，五個抗原中的四個抗原的R²≥0.99，第五個抗原的R²≥98％（圖D）。

高重復(fù)性

超過檢測極限或≥1：69120的血清稀釋液的CV小于15％，這表明該方法在重復(fù)測量中具有極好的可重復(fù)性。

結(jié)論：

隨著SARS-CoV-2入侵機體的發(fā)展，可能會出現(xiàn)幾種不同的抗原，這些抗原會導(dǎo)致體液免疫反應(yīng)異常，而針對這些抗原的抗體的出現(xiàn)可能表明了疾病進展和病毒中和的不同階段。因此，傳統(tǒng)ELISA檢測僅用一種抗原包被的蛋白只能捕獲非常有限的免疫學(xué)反應(yīng)信息。但借助適用于全自動Western（Jess/Wes）的SARS-CoV-2多抗原血清學(xué)檢測試劑盒，可以同時分析COVID-19中常見的多達5種不同抗原在人血清或血漿樣品中的IgG反應(yīng)性。這使得能夠?qū)�體液反應(yīng)進行更深入的分析，并且揭示了血清反應(yīng)性之間的差異，而這種差異是傳統(tǒng)ELISA試劑盒無法獲取的。

參考文獻：

1. Sensitivity in detection of antibodies to nucleocapsid and spike proteins of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 in patients with coronavirus disease 2019, P Burbelo, F Riedo, C Morishima, S Rawlings, D Smith, S Das, J Strich, D Chertow, R Davey and J Cohen, The Journal of Infection Diseases, 2020; 222:206-213.

2. Isolation of potent SARS-CoV-2 neutralizing antibodies and protection from disease in a small animal model, T Rogers, F Zhao, D Huang, N Beutler, A Burns, W He, O Limbo, C Smith, G Song, J Woehl, L Yang, R Abbott, S Callaghan, E Garcia, J Hurtado, et al., Science, 2020; 369(6506):956–963.

3. A panel of human neutralizing mAbs targeting SARS-CoV-2 spike at multiple epitopes, T Noy-Porat, E Makdasi, R Alcalay, A Mechaly, Y Levy, A Bercovich-Kinori, A Zauberman, H Tamir, Y Yahalom-Ronen, M Israeli, E Epstein, H Achdout, S Melamed, T Chitlaru, S Weiss, et al., Nature Communications, 2020; 11(1):1–7.

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