測定原理:
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。
需要的儀器,耗材:
研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液槍和蒸餾水。
測定意義:
PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。測定原理:PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。需要的儀器,耗材:研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液槍和蒸餾水。
樣本處理
1、細胞或細菌樣本的制備: 先收集細胞或細菌樣本到離心管內,棄上清,按照每 500 萬細胞或細菌加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或 細胞(功率 20%,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次)。10000rpm,4℃離心 20min,取上清,置冰上待測。
2、組織樣本: 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液,冰上充分研磨。16000g,4℃離心 20min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣本:直接檢測。
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