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代做免疫組化IHC實驗，代做免疫組織化學(xué)實驗，常用抗體免費！預(yù)實驗免費！中科院細(xì)胞與免疫學(xué)實驗平臺
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免疫組化實驗主要步驟
（預(yù)實驗免費！常用抗體免費�。�
1. 洗載玻片:
將載玻片置于重鉻酸鉀和濃H2SO4混合液中,目的是為了是載玻片上的硅膠等除去,同時使一些肉眼看不見的凹凸不平的表面變平整,便于組織吸附,然后置于清水中清洗,除去殘余的重鉻酸鉀和濃H2SO4（大約沖一個小時左右）,再將載玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C溫箱中，將多聚賴氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys帶正電，而大多數(shù)的組織帶負(fù)電荷，從而產(chǎn)生吸附作用。
2. 包埋組織:
先在鐵模具中加入一些液態(tài)石蠟，先稍微冷卻，然后再將待包埋的組織置于石蠟之中，并排列整齊，再將塑料模具盒蓋上，最后加入少許液體石蠟，進行冷凍，使石蠟變成固態(tài)。
3. 切片：
將包埋好的組織從模具上取下來，并置于石蠟切片機上，切片機通過調(diào)節(jié)上下左右來來使組織和切割方向一致，然后調(diào)節(jié)切片的厚度，一般為5µm,如果比較難切，則可以適當(dāng)調(diào)整厚度，用毛筆將切割的載玻片向外拉，并用小鑷子將包含有完整組織的載玻片置于40°C溫水中。
4. 撈組織：
當(dāng)組織載玻片置于40°C溫水中之前，要先將水浴中的氣泡趕走，以免氣泡受熱上浮而貼到組織上，組織受熱展開，最好是組織不起皺紋，用載玻片撈組織時，一般取載玻片的下1/3或者下1/2一般每種組織撈5-6張，其中2-3張是備用的，每張載玻片上通常撈兩份組織，做對照使用，這樣形成的誤差就比較小了，而且撈載玻片的時候最好方向一致，以便觀察，再將撈出來的載玻片置于架子上，放入37°C溫箱中烘干。
5. 脫蠟：
依次將載玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脫蠟作用的主要是二甲苯,依據(jù)的是相似相溶的原理.一般在每個試劑中放10min,天氣熱可以少放幾分鐘,相反,天氣較冷的話,就要適當(dāng)延長脫蠟時間,一般為12-15min。
6. 抗原修復(fù)：
脫蠟后在清水中沖洗一段時間，加入3%H2O2浸泡10min，從而除去內(nèi)源性的過氧化氫酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗兩次，再加入檸檬酸緩沖液，放入微波爐中蒸煮3min（中火），一般剛到沸騰即可，冷卻至室溫，然后再蒸煮一次，冷卻至室溫，蒸煮的目的是為了使抗原的位點暴露出來。
7. 血清封閉：
冷卻至室溫后，將檸檬酸緩沖液倒掉，水洗2次，并將載玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干組織周圍的PBS液，馬上加上血清，使一些非特異性的位點封閉起來，然后放入37°C溫箱中半小時。血清稀釋10倍（900µlPBS：100µl血清封閉液）。
8. 加一抗：
將溫箱中的載玻片取出，用吸水紙擦干載玻片反面和正面組織周圍的血清，加一抗，如果做對照實驗，就在對照的組織上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存過夜。
9. 加二抗：
將載玻片從冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干組織周圍的PBS后加上二抗,然后置于37°C溫箱中半小時。
10. 加SABC:
將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干組織周圍的PBS后加上SABC, 然后置于37°C溫箱中半小時。SABC稀釋100倍（990µlPBS：10µlSABC）。
11. 加顯色劑：
將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干組織周圍的PBS后加上顯色劑。（顯色劑的配置：在1ml水中加1滴顯色劑A，搖勻，然后加1滴顯色劑B，搖勻，再加1滴顯色劑C，搖勻） A：DAB B：H2O2 C：磷酸緩沖液
12. 復(fù)染：
將顯色后的片子用清水沖洗一段時間后，浸泡于蘇木精中染色，一般動物組織為半分鐘，植物組織3-5min。
13. 脫水：
將復(fù)染后的片子置于水中沖洗后，依次將載玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每個試劑中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通風(fēng)柜中。
14. 封片：
用中性樹膠滴在組織旁邊，再用蓋玻片蓋上，要先放平一側(cè)，然后輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好片子后置于通風(fēng)柜中晾干。
上海維景生物科技有限公司是一家專注生命科學(xué)領(lǐng)域的企業(yè)，
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生物實驗技術(shù)服務(wù)項目列表
預(yù)實驗免費！常用抗體免費！
分子克隆技術(shù)服務(wù)：載體構(gòu)建、定點突變、RT-PCR、熒光定量PCR、SNP分型等；
蛋白免疫學(xué)實驗服務(wù)：Western Blot檢測、免疫組化檢測、流式檢測與分選，細(xì)胞凋亡檢測與分析、抗體制備等。
細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)服務(wù)：細(xì)胞培養(yǎng)、原代培養(yǎng)、細(xì)胞株構(gòu)建、三維培養(yǎng)、病毒包裝（慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄和腺病毒）、細(xì)胞分選與培養(yǎng)、細(xì)胞侵襲與催化、共聚焦檢測等技術(shù)
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