代做免疫印跡Western Blot實(shí)驗(yàn)

Western Blot，WB

代做免疫印跡Western Blot實(shí)驗(yàn)，代做WB實(shí)驗(yàn)，免疫印跡實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，WB實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

服務(wù)類別：	免疫與抗體	總訪問：	4403
最后更新：	2013-4-7	半年訪問：	60
參考報價：	150
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服務(wù)商：上海維景生物科技有限公司

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服務(wù)介紹
公司簡介

代做免疫印跡Western Blot實(shí)驗(yàn)，代做WB實(shí)驗(yàn)

Western Blot標(biāo)準(zhǔn)protocol

WB檢測基本過程

1、獲取細(xì)胞或組織裂解物

1)根據(jù)檢測蛋白的位置選擇合適的裂解buffer：

蛋白位置	推薦buffer
全細(xì)胞	NP-40 or RIPA
胞漿（可溶性蛋白）	Tris-HCl
胞漿（骨架結(jié)合蛋白）	Tris-Triton
膜蛋白	NP-40 or RIPA
核蛋白	RIPA or 核蛋白提取試劑盒
線粒體蛋白	RIPA or 線粒體分離試劑盒

亦可購買商業(yè)化的蛋白提取試劑盒來保證標(biāo)本制備的質(zhì)量

2)選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測的準(zhǔn)確性！

2、蛋白定量

常用的蛋白定量方法：Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后，可根據(jù)情況將標(biāo)本保存在-20°C /-80°C備用，進(jìn)行免疫沉淀（IP）或者直接進(jìn)行電泳分離蛋白

3、電泳分離蛋白質(zhì)

根據(jù)待測蛋白狀態(tài)確定電泳條件：

根據(jù)待測蛋白分子量大小確定凝膠濃度

蛋白分子量（kDa）	凝膠濃度（％）
4-40	20
12-45	15
10-70	12.5
15-100	10
25-200	8

4、轉(zhuǎn)膜

根據(jù)不同的檢測目的和待測蛋白的特性，選擇合適的膜類型。常用的轉(zhuǎn)移膜類型有：PVDF膜、硝酸纖維素膜（NC膜）和尼龍膜，其中PVDF和NC膜的使用頻率最高。

5、封閉

去掉膜上多余的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，降低背景。常用的封閉溶液有：含BSA或者脫脂奶粉的TBST或TBS

6、一抗孵育

一抗的選擇成功與否，是整個WB實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵：選擇一抗有以下幾個注意點(diǎn)：

選擇適合檢測標(biāo)本種屬的一抗（說明書有驗(yàn)證）
選擇適用于WB實(shí)驗(yàn)方法的一抗（說明書有驗(yàn)證）
選擇單克隆抗體或者經(jīng)過親和純化的多克隆抗體

7、二抗孵育

根據(jù)說明書推薦濃度使用TBST稀釋一抗。如果說明書沒有推薦濃度，可進(jìn)行多個稀釋比例進(jìn)行摸索最佳稀釋度（1:1000-1:20000）。孵育條件一般為室溫1-2小時

8、底物孵育

選擇顯色或者化學(xué)發(fā)光底物。一般傾向于化學(xué)發(fā)光，靈敏度高且背景低，節(jié)省抗體用量

9、結(jié)果分析和檢測

凝膠成像系統(tǒng)檢測或者暗室曝光到膠片

Note：從封閉開始，每步之間都需要用TBST進(jìn)行洗滌，3次，每次5min

上海維景生物科技有限公司是一家專注生命科學(xué)領(lǐng)域的企業(yè)，借助中科院細(xì)胞與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺，擁有強(qiáng)大的資金背景支持和專業(yè)的團(tuán)隊(duì)等資源。公司面向全國市場，迅速發(fā)展，廣納英才，現(xiàn)已建成專業(yè)生命科學(xué)產(chǎn)品銷售團(tuán)隊(duì)，其中大部份是在生命科學(xué)市場上工作多年，有豐富的銷售經(jīng)驗(yàn)，也有良好的客戶資源，銷售渠道全面覆蓋華東大部分工業(yè)以及科研客戶，團(tuán)隊(duì)中免疫學(xué)及相關(guān)專業(yè)碩士以上學(xué)歷人士達(dá)50%，有較強(qiáng)的技術(shù)支持能力，在針對專業(yè)技術(shù)服務(wù)中能夠提供完善周到的專業(yè)化服務(wù)，對客戶在使用產(chǎn)品過程中提出的問題能滿意答復(fù)，并可及時傳遞最新的產(chǎn)品技術(shù)資料信息。　　

上海維景生物科技有限公司憑借優(yōu)質(zhì)的技術(shù)服務(wù)平臺和專業(yè)的技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊(duì)，維景生物傾情打造最高質(zhì)量的技術(shù)服務(wù)。至今，已為廣大科研客戶和合作伙伴提供了實(shí)時定量 PCR、細(xì)胞凋亡、 Western-blot 、 Elisa 、免疫組化、原位雜交、質(zhì)粒載體的構(gòu)建、穩(wěn)定細(xì)胞系的篩選、 siRNA干擾效率的鑒定、雙螢光報告系統(tǒng)、蛋白表達(dá)及純化、腺病毒 / 腺相關(guān)病毒 / 慢病毒的包裝服務(wù)、單多克隆抗體的制備、 SCI文章的修改及發(fā)表服務(wù)等。

上海維景生物科技有限公司是一家專注生命科學(xué)領(lǐng)域的企業(yè)，借助中科院細(xì)胞與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺，擁有強(qiáng)大的資金背景支持和專業(yè)的團(tuán)隊(duì)等資源。公司面向全國市場，迅速發(fā)展，廣納英才，現(xiàn)已建成專業(yè)生命科學(xué)產(chǎn)品銷售團(tuán)隊(duì)，其中大部份是在生命科學(xué)市場上工作多年，有豐富的銷售經(jīng)驗(yàn)，也有良好的客戶資源，銷售渠道全面覆蓋華東大部分工業(yè)以及科研客戶，團(tuán)隊(duì)中免疫學(xué)及相關(guān)專業(yè)碩士以上學(xué)歷人士達(dá)50%，有較強(qiáng)的技術(shù)支持能力，在針對專業(yè)技術(shù)服務(wù)中能夠提供完善周到的專業(yè)化服務(wù)，對客戶在使用產(chǎn)品過程中提出的問題能滿意答復(fù)，并可及時傳遞最新的產(chǎn)品技術(shù)資料信息�！　�

上海維景生物是一家面向全國以專業(yè)從事免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)服務(wù)外包和免疫學(xué)試劑代理銷售為主的高新技術(shù)企業(yè)。公司的服務(wù)對象主要為醫(yī)藥科研人員、大型制藥公司等。

公司專注開展以下五種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)服務(wù)：免疫印跡（Western Blotting）、免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP) 。絕對保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，客戶滿意后才收取尾款。

同時公司還是美國Engibody品牌的全國獨(dú)家總代理，Engibdoy公司產(chǎn)品專注于表觀遺傳學(xué)、標(biāo)簽抗體、內(nèi)參抗體及標(biāo)簽抗體偶聯(lián)beads等領(lǐng)域。其開發(fā)的標(biāo)簽抗體偶聯(lián)agarose beads（affinity gel）在科研以及臨床研究中享有很高的聲譽(yù)，更借助Engibody在標(biāo)簽抗體、內(nèi)參抗體領(lǐng)域的優(yōu)勢，成為免疫印跡WB和免疫沉淀IP實(shí)驗(yàn)試劑的專業(yè)供應(yīng)商。因卓越的產(chǎn)品質(zhì)量及良好的客戶口碑，Engibody敢于執(zhí)行倒賠政策，抗體承諾客戶不滿意即可申請無條件全額退款，如若產(chǎn)品質(zhì)量證實(shí)有瑕疵，則除了無條件全額退款以外，還會倒賠客戶一定金額。

維景生物是一家專注標(biāo)簽抗體偶聯(lián)beads（affinity gel），標(biāo)簽抗體，HRP直標(biāo)標(biāo)簽抗體，內(nèi)參抗體等抗體銷售,及WB,IP,Co-IP,ChIP實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)的高科技生物公司

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