|
TUN EL 技術(shù)， 是原位檢測(cè)細(xì)胞凋亡最敏感、快速、特異的新方法， 已廣泛用于生物、醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。
|
|||||||||||||||||
| [發(fā)表評(píng)論] [本類其他服務(wù)] [本類其他服務(wù)商] | ||||||||||||||||||
| 服務(wù)商： 武漢傲星生物科技有限公司 | 查看該公司所有服務(wù) >> |
概念：TUN EL 技術(shù)， 即脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶( Terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT )介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標(biāo)記(TdT-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL ) 技術(shù)， 是原位檢測(cè)細(xì)胞凋亡最敏感、快速、特異的新方法， 已廣泛用于生物、醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。
原理
對(duì)不同組織切片先增加細(xì)胞膜通透性，然后讓 rTDT 和生物標(biāo)記的 dTUTP 進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，在 rTDT 的輔助下 dTUTP 與核斷裂的 DNA 3』-OH 結(jié)合，再用 HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素與 dTUTP 上的 biotin 結(jié)合（每個(gè)鏈霉親和素至少可以再結(jié)合 3 個(gè) biotin 分子），最后用 DAB、過(guò)氧化氫與 SP 上的辣根過(guò)氧化物酶 HRP 發(fā)生氧化、環(huán)化反應(yīng)，形成苯乙肼聚合物而呈現(xiàn)棕褐色，最終通過(guò)計(jì)數(shù)每張切片上不同視野中 TUNEL 陽(yáng)性細(xì)胞的比例來(lái)判斷細(xì)胞凋亡發(fā)生情況。
實(shí)驗(yàn)流程
石蠟切片脫蠟至水→抗原修復(fù)→畫圈自發(fā)熒光淬滅→血清封閉→孵育一抗→孵育二抗→DAPI復(fù)染細(xì)胞核→抗熒光淬滅封片劑封片→鏡檢→避光4度保存
注意事項(xiàng)
1、采用石蠟切片制片，取材后應(yīng)立即放入固定液中，4度運(yùn)輸，避免凍存
2、采用冰凍切片制片應(yīng)取新鮮組織，-80℃保存，干冰運(yùn)輸
