各款熒光定量PCR儀的性能比較

本人從事熒光定量PCR檢測試劑的開發(fā)工作，用過市場上主流的多款熒光定量PCR儀，如ABI5700，ABI7700，ABI7000，ABI7300，ABI7500，MJ opticon，MJ opticon2，bio-rad ICycler，LightCycler1.5，roter-gene3000，Stratagene Mx3000P，line-gene等等。這種儀器各有各的特點，但都存在不足之處。

ABI公司的熒光定量PCR儀產(chǎn)品比較多，成系列，但目前而言ABI5700和ABI7700不能實時在線地檢測熒光，因而已經(jīng)退出歷史舞臺，尤其是ABI7700，不但很貴，而且采用蘋果機電腦，使用很不方便。ABI7000目前也已經(jīng)淘汰，我用的這臺儀器老出問題，曲線極不光滑，但同樣的反應(yīng)體系在國產(chǎn)機杭州博日line-gene上曲線非常好，在ABI7500上曲線也很光滑，所以，本人估計是ABI7000設(shè)計上有不足之處。而且鹵鎢燈特別容易壞，在南方，我們實驗室平均5個月?lián)Q一個，配件容易壞，后續(xù)使用成本就會高一些。
現(xiàn)在市場上的ABI7300就是ABI7000的簡單升級版，硬件設(shè)計上幾乎沒有改變，只是換過幾個性能更好的配件，軟件有所升級。

另外我個人感覺ABI7900（ABI公司第二代產(chǎn)品）有些華而不實，價格應(yīng)該是所有熒光定量PCR儀中最貴的，硬件上跟ABI7700差不了太多，但性能指標還不如ABI7500（ABI公司第三代產(chǎn)品），硬件設(shè)計上也不如ABI7500合理。所以這個型號的儀器，誰買了，用的時候會不呼上當。

ABI7500是ABI公司最成功的產(chǎn)品，各方面性能都不錯，雖然加熱模塊還是有一些邊緣效應(yīng)，但使用中央的孔位效果可以得到保證，在96孔板使用中間的48個孔位，結(jié)果都能得到保證。

總的來說，ABI公司在熒光定量領(lǐng)域上還是做出很多貢獻的，其儀器在科研上還是可以用的，但由于硬件設(shè)計上的缺陷，需要額外的ROX染料進行校正，并且占用了一個檢測通道。國內(nèi)的試劑廠商都不加ROX染料，科研用戶一般也不使用，所以其檢測的準確性和重復(fù)性還是很難保證的，尤其濃度較低的模板進行檢測時效果不佳，偏差會很大。

羅氏Roche的LightCycler以運行速度快而著稱，在國內(nèi)市場占有率最高，其設(shè)計保證了臨床診斷的準確性，又充分考慮了科研功能。但本人最初使用時老出問題，有時候陽性曲線做不出來，后來發(fā)現(xiàn)這跟其獨特的毛細管設(shè)計有關(guān)系，因為毛細管很細，所以反應(yīng)液在毛細管中的對流交換非常不暢，沒有充分混勻時就加入毛細管會影響反應(yīng)的進行，當然，熱啟動酶就不會有這方面的問題了。所以本人在操作時都特意將反應(yīng)液混合充分后再加入毛細管，這樣在后來的實驗中就沒有出現(xiàn)過問題。

本人開始使用羅氏的儀器時最怕毛細管斷裂，操作時特別擔心，熟練以后，規(guī)范使用隨機贈送的操作配件，也沒見毛細管斷過。而且最重要的是，羅氏的儀器穩(wěn)定性非常好，靈敏度明顯比其它儀器高，這也許跟毛細管和其檢測元件有關(guān)系，檢測重復(fù)性也非常好，所得定量結(jié)果可信度高。本人所使用的羅氏LightCycler1.5三四年了也沒出現(xiàn)硬件的故障。

另外，采用毛細管最大的優(yōu)點恐怕就是可以大量節(jié)省成本，因為目前只有毛細管這種反應(yīng)裝置才可以采用10uL的反應(yīng)體系而不影響試劑的檢測靈敏度和穩(wěn)定性，這樣大大地節(jié)省了試劑的成本。同樣用普通PCR反應(yīng)管進行10uL體系的熒光定量實驗，效果很差，而且明顯靈敏度下降，檢測結(jié)果不穩(wěn)定。

羅氏公司Roche推出的LightCycler2.0在原有基礎(chǔ)上檢測通道增加到六個，軟件功能也更加豐富。據(jù)說最新推出的LightCycler480是目前全球最先進的熒光定量PCR儀，突破了傳統(tǒng)技術(shù)的瓶頸，推出了不具邊緣效應(yīng)的高通量熒光定量PCR儀。具體沒有用過，聽說使用非常靈活。

MJ的儀器總體上而言比較穩(wěn)定，但檢測靈敏度不高，功能單一，檢測通道不多，運行時間太長，一般一次實驗要兩個多小時。所謂的溫度梯度功能在熒光定量PCR平臺上一點用處都沒有，這主要是由該技術(shù)的原理決定的，所以這個功能只是作秀了。

伯樂的ICycler儀器也許是設(shè)計上的缺陷還是什么原因，同樣的反應(yīng)體系，在該儀器上進行實驗時，陽性樣本的擴增曲線熒光增量比較低，檢測效果不好，所以在全國很少用戶使用該儀器。伯樂的熒光定量PCR儀目前在國際上仍屬低端產(chǎn)品，返修率太高。
Line-gene儀器的使用比較方便，但返修率較高，不過廠家就在國內(nèi)，售后服務(wù)非常及時。

roter-gene3000跟羅氏公司的LightCycler有很多相似之處，只是roter-gene在操作時比較麻煩，而且采用普遍反應(yīng)管，光透性不好，影響了檢測結(jié)果，這可以從其原始曲線上看出來，但該儀器的軟件所表現(xiàn)的是對數(shù)曲線，把其原始曲線上的曲析不平掩蓋了，其靈敏度不高，在進行微量檢測時往往會得到大量假陰性結(jié)果。

Stratagene Mx3000P據(jù)說是信價比最高的熒光定量PCR儀，但做工非常粗糙，打開樣本倉都可以看到線路和齒輪，估計是為了降低成本而偷工減料了。其采用的鹵鎢燈光源，使用成本也非常高。該儀器一般在使用中央孔位進行實驗時，結(jié)果不錯，但使用周邊孔位時效果很差。而且其檢測靈敏度也比較低。

聽說去年Stratagene公司因為PCR的酶侵犯了美國第三浪潮公司的專利權(quán)，判罰了2200萬美元，其熒光定量PCR儀也屬侵權(quán)產(chǎn)品，這讓我想起MJ破產(chǎn)的案例，由于MJ的熒光定量PCR儀侵犯了ABI和Roche的專利權(quán)而被重罰，最終破產(chǎn)而被伯樂公司低價收購。如果Stratagene被罰破產(chǎn)的話，其不一定這么幸運有公司收購它，最終的受害者是廣大用戶，其售后服務(wù)無法得到保證，配件得不到供應(yīng)。

一般而言，用戶要選擇什么樣的儀器，關(guān)鍵看自己將來開展的工作，我個人認為，在臨床診斷上，儀器的穩(wěn)定性和檢測準確性、檢測靈敏度當然是首選的指標，在科研上熒光定量PCR技術(shù)只會用于整個課題中一個環(huán)節(jié)，其結(jié)果并沒有實際意義，其意義在于對后續(xù)研究的指導(dǎo)性，當然所得數(shù)據(jù)越準確，對后續(xù)研究的指導(dǎo)性就越高。結(jié)果偏差越大的儀器反而會誤導(dǎo)用戶。

儀器廠商推出的所謂四色五色檢測通道都是騙人的。80%的用戶一輩子只用到一個通道，而且科研用戶不會因為做了多通道檢測實驗而發(fā)好文章，除非期刊的編委太弱智。只不過檢測通道多了，對熒光素的選擇余地比較大。儀器的整體性能才是更值得關(guān)注的，如檢測靈敏度、各反應(yīng)孔位的一致性、儀器穩(wěn)定性等等。
當然還要看一下經(jīng)費情況，經(jīng)費充足可以買個好的，經(jīng)費不多，就買個實用的，花哨的低端產(chǎn)品很難解決實際問題。