人類基因組DNA提取及瓊脂糖凝膠電泳分析

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?BR>　　1．熟悉分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的操作特點(diǎn)。
　　2．掌握人類基因組DNA提取的基本原理。
　　3．熟悉人類基因組DNA提取的基本方法。
　　4．熟悉瓊脂糖凝膠電泳的原理和操作。
實(shí)驗(yàn)原理：
　　用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞膜，收集細(xì)胞核，加入SDS破裂核膜，用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并從DNA上解離下來(lái)，經(jīng)苯酚﹑氯仿抽提去除蛋白質(zhì)，無(wú)水乙醇沉淀DNA，75%乙醇洗滌DNA沉淀，真空干燥后，溶解于TE中即得到高分子量的DNA。
　　本次實(shí)驗(yàn)使用的試劑盒系直接加入裂解液裂解細(xì)胞后，用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并從DNA上解離下來(lái)，并使用RNaseA降解RNA,再利用特殊硅基質(zhì)膜吸附DNA的特性，可快速、高效地純化回收基因DNA。

操作步驟：
細(xì)胞裂解與RNase/蛋白酶K 消化
　　1. 取100 μl抗凝全血置于1.5ml Eppendorf離心管中，再加入100 μl裂解液和20 μl RNaseA/蛋白酶K液，用移液器來(lái)回吹打混勻，室于55℃溫浴35分鐘，其間來(lái)回顛倒離心管幾次，直至溶液呈水溶狀。
　　2. 加入10μl 3M的NaAc(pH 4.8)，隨后加入1250 μl結(jié)合緩沖液，充分振蕩混勻，12，000 rpm離心30秒。

DNA與吸附柱結(jié)合
　　3．用移液器Tip轉(zhuǎn)移上清并加入到離心吸附柱（套好收集管）中，放置1分鐘，12，000 rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液。
　　注意：待轉(zhuǎn)移上清約1300μl，離心吸附柱容量約650 μl，故需每次轉(zhuǎn)移上清650 μl到離心吸附柱中，離心，倒掉收集管中的廢液，重復(fù)實(shí)驗(yàn)操作步驟3。

DNA的純化
　　4. 再加入600 μl洗滌緩沖液（washing buffer）到離心吸附柱（套好收集管）中，12，000 rpm 離心30秒。
　　5．重復(fù)步驟4一次，12，000 rpm 離心3分鐘以充分除去洗滌緩沖液。
　　6．小心取出離心吸附柱，棄收集管，將離心吸附柱套入一個(gè)干凈的1.5ml Eppendorf 離心管，并加入50 μl洗脫緩沖液(elution buffer) 到離心吸附柱中(洗脫緩沖液一定要加在離心吸附柱的正中)，放置1分鐘，于12，000 rpm 離心30秒。
　　7．取出Eppendorf 離心管，其中便是所提取基因組DNA。

DNA的瓊脂糖凝膠電泳
　　8．取8 -10μl基因組DNA,并加入2 μl上樣緩沖液，混勻，加樣到1％瓊脂糖凝膠點(diǎn)樣孔中,電泳。