影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法

操作

注意問題

解決方案

加樣

1、血清或血漿標本分離不好即進行加樣

 

2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵育箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）

 

3、加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外

1、標本為血清，最好將血液先自然存放1-2h后，再用3000rmp離心15分鐘，標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要儲存，則置于-20℃的低溫冰箱中

2、加樣后及時放入孵箱

3、加酶試劑后用吸水紙在酶標版表面輕拭吸干

4、如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑

5、酶標本較多，請分批操作

孵育

1、孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于徹底清洗

2、孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底

1、貼封片或加蓋

2、按說明步驟嚴格控制操作時間

洗板

1、采用手工洗板，孔與孔之見液體交叉

2、采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差

3、反應板過多造成洗板等待時間長

1、保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干

 

2、合理安排，或多用幾臺洗板機

顯色

1、顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑

2、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流

1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用

2、加樣時保持顯色劑不外流

3、A、B液應避免接觸金屬器械

終止

加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加

加終止液時應避免產生氣泡

讀板

讀板時板底不清潔

應保持酶標板清潔

全過程

1、整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸

2、實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量