誘導動物細胞融合的方法

 

在體外培養(yǎng)條件下，動物細胞會自發(fā)融合，但是頻率極低。因此，一般都需要添加具有誘導細胞融合效應的生物或化學藥劑，或者采用電融合技術(shù)，人為地促進細胞融合。

 

 

病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導動物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等，其中仙臺病毒最常用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內(nèi)酯滅活，使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。

用滅活的仙臺病毒誘導細胞融合的

優(yōu)點：融合率較高，對各種動物細胞都適宜，且仙臺病毒能在雞胚中大量繁殖，容易培養(yǎng)；

缺點：仙臺病毒不穩(wěn)定，在保存過程中融合活性會降低，并且制備過程比較煩瑣。此外，病毒引進細胞后，可能會對細胞的生命活動產(chǎn)生干擾。

 

聚乙二醇PEG誘導融合 

 

聚乙二醇PEG具有強烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用，能夠有效地促進植物原生質(zhì)體和動物細胞的融合。在不同種類的動物細胞混合液中加入聚乙二醇，就會發(fā)生細胞凝集作用；在稀釋和除去聚乙二醇的過程中，就會發(fā)生細胞融合。聚乙二醇誘導細胞融合的機理，目前還不太清楚。聚乙二醇是化學試劑，使用起來很方便，誘導細胞融合的頻率比較高，但是它有一定毒性，對有些細胞(如卵細胞)不適用。

 

20世紀80年代建立起來的細胞融合技術(shù)，是將兩種細胞的混合液置于低壓交流電場中，使細胞聚集成串珠狀，然后施加高壓電脈沖，以促使細胞融合。緊密排列的細胞，在相互接觸的細胞膜之間會出現(xiàn)無蛋白顆粒的脂質(zhì)區(qū)，當受到電擊時，這個區(qū)域就會被擊穿，產(chǎn)生脂雙層膜孔，導致細胞之間的細胞質(zhì)連通，進而發(fā)生細胞融合。細胞融合技術(shù)有許多優(yōu)點，如誘導細胞融合的頻率高，對細胞無毒害作用，操作簡便，可重復性好。