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漢莎快訊(一):目前最流行的測(cè)定光合速率的方法

瀏覽次數(shù):5508 發(fā)布日期:2009-2-12  來(lái)源:漢莎科學(xué)儀器有限公司
 
漢莎快訊光合作用研究系列文章
 
目前最流行的測(cè)定光合速率的方法
 
   姚廣  漢莎科學(xué)儀器有限公司 (山東 271000)
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        光合作用是地球上最重要的生命現(xiàn)象,它是唯一能把太陽(yáng)能轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的化學(xué)能貯藏在有機(jī)物中的過(guò)程,是維持地球上物質(zhì)循環(huán)的關(guān)鍵環(huán)節(jié),也是農(nóng)作物產(chǎn)量形成的決定性因素。因此,提高光合作用對(duì)于提高作物產(chǎn)量具有十分重要的意義。在植物生理學(xué)、生態(tài)學(xué)、作物栽培學(xué)、育種學(xué)等研究工作中,經(jīng)常需要測(cè)定光合速率,研究者們總想創(chuàng)造出一種快速、準(zhǔn)確而又簡(jiǎn)便的光合速率測(cè)定方法,以滿(mǎn)足研究工作的要求。
    根據(jù)光合作用的總反應(yīng)式  
                 CO2 + 2H2O* + 4.69kJ → (CH2O) + O*2 + H2O
     
     原則上我們可以測(cè)定任一反應(yīng)物的消耗速率或產(chǎn)物的生成速率來(lái)表示光合速率。常用方法的是測(cè)定CO2的吸收、O2的釋放和有機(jī)物的積累三個(gè)方面,即通過(guò)測(cè)定干物質(zhì)的積累表示光合速率的改良半葉法、通過(guò)測(cè)定CO2吸收的紅外線(xiàn)CO2氣體分析儀法(光合儀)以及通過(guò)測(cè)定O2釋放的氧電極法。
    改良半葉法只能測(cè)得植物葉片的光合速率,而無(wú)法測(cè)得與光合速率有關(guān)的其它參數(shù),如氣孔導(dǎo)度、蒸騰速率、細(xì)胞間隙CO2濃度、CO2補(bǔ)償點(diǎn)、光補(bǔ)償點(diǎn)等,并且該方法所用的實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)(4~5h),如果遇到陰雨天氣,則無(wú)法進(jìn)行測(cè)定。因此,該方法用于科學(xué)研究有很大的局限性,已經(jīng)慢慢退出了歷史舞臺(tái)。因此,現(xiàn)在最流行的測(cè)定光合速率的方法是通過(guò)測(cè)定CO2吸收的紅外線(xiàn)CO2氣體分析儀法(光合儀)以及通過(guò)測(cè)定O2釋放的氧電極法(氧電極)。
   
 
 
一、氧電極法測(cè)定氧氣的釋放
 
         氧電極法是通過(guò)測(cè)定離體葉片、細(xì)胞或葉綠體的光合放氧量來(lái)表示植物的光合速率。目前通用的是薄膜氧電極,由鑲嵌在絕緣材料上的銀極(陽(yáng)極)和鉑極(陰極)構(gòu)成。電極表面覆以聚四氟乙烯薄膜,在電極與薄膜之間充以氯化鉀溶液作為電解質(zhì),當(dāng)在兩極間加0.6~0.8V的極化電壓時(shí),透過(guò)薄膜進(jìn)入氯化鉀溶液的溶解氧便在鉑極上還原,在銀極上發(fā)生氧化反應(yīng),使電極間產(chǎn)生擴(kuò)散電流,電流的大小與透過(guò)膜的氧量成正比。電極控制器將電極間產(chǎn)生的電流信號(hào)轉(zhuǎn)換成單位時(shí)間、單位體積溶液(液相氧電極)或單位葉面積(氣相氧電極)的放氧量,從而測(cè)得植物的光合速率。
       該方法只能測(cè)定離體組織的光合速率,測(cè)定時(shí)需要將葉片浸在含NaHCO3的溶液中,排除了氣孔因素對(duì)光合作用的影響,因此,它測(cè)定的光合速率只反映了植物光合速率的最大潛力,無(wú)法反映植物處在自然環(huán)境中的實(shí)際光合速率。
       用氧電極研究植物的光合速率目前主要的產(chǎn)品有英國(guó)Hansatech科學(xué)儀器公司生產(chǎn)的Chlorolab系列及Oxygraph、 Oxytherm等型號(hào)的液相氧電極和Leaflab系列的氣相氧電極,美國(guó)Yellow Springs儀器有限公司生產(chǎn)的YSI-53型生物氧監(jiān)測(cè)儀等。
 
 
 
二、光合儀(紅外線(xiàn)CO2分析儀)測(cè)定CO2的吸收
 
      光合儀應(yīng)用紅外線(xiàn)CO2分析儀測(cè)定光合過(guò)程中對(duì)CO2的吸收從而計(jì)算凈光合速率。
      紅外線(xiàn)CO2分析儀的原理:
      許多由異原子組成的具有偶極距的氣體分子,如CO2、CO、H2O、SO2、N2O、NH3等,在波長(zhǎng)2.5~25微米的中波段紅外光區(qū)都有特異的吸收帶,紅外光經(jīng)過(guò)上述氣體分子時(shí),與氣體分子振動(dòng)頻率相等能夠形成共振的紅外光,便被氣體分子吸收,使透過(guò)的紅外光能量減少,被吸收的紅外光能量的多少與該氣體的吸收系數(shù)(K)、氣體濃度(C)和氣層的厚度(L)有關(guān),并服從朗伯-比爾定律:
                E=EoeKCL
          式中:Eo-入射光能量;E-透射光能量。
      CO2在中段紅外光區(qū)的吸收帶有4處,吸收峰分別在波長(zhǎng)2.69、2.77、4.26和14.99μm處,其吸收率分別為0.54%、0.31%、23.2%和3.1%。其中峰值為4.26μm的吸收波長(zhǎng)最強(qiáng),且不與H2O的吸收帶重疊,而2.69和2.77μm的吸收帶則與H2O的吸收相重疊。
       H2O吸收紅外線(xiàn)的最大吸收峰值為2.59μm,同樣的原理應(yīng)用紅外線(xiàn)技術(shù)可以準(zhǔn)確地測(cè)量氣體中水分的含量。
       因此,我們可以通過(guò)紅外線(xiàn)CO2氣體分析儀檢測(cè)植物在光合作用過(guò)程中CO2的變化量來(lái)測(cè)得植物葉片的光合速率,測(cè)定H2O的變化量來(lái)測(cè)得植物葉片的蒸騰速率和氣孔導(dǎo)度等相關(guān)參數(shù)。
       目前國(guó)產(chǎn)的光合儀不多而且多不易受到研究人員的青睞。進(jìn)口的光合儀由于在穩(wěn)定性、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性方面優(yōu)于國(guó)產(chǎn)光合儀,現(xiàn)在進(jìn)口光合儀成為光合速率研究中的首選。常見(jiàn)的光合儀有美國(guó)(原英國(guó))PP Systems公司的CIRAS-2型便攜式光合儀以及Licor公司的光合儀。
 
       現(xiàn)在隨著科學(xué)研究的發(fā)展,僅僅測(cè)定光合速率,或者測(cè)定植物的光合日變化等已經(jīng)不能達(dá)到發(fā)表文章的要求了。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中應(yīng)用氧電極和光合儀提供的光合速率等重要數(shù)據(jù)來(lái)說(shuō)明我們課題要解決的問(wèn)題,為我們的研究提供真實(shí)可靠的資料。
 
 
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