利用液體閃爍計數(shù)器測量瞬時化學發(fā)光強度

摘要：通過加工一個帶有注射孔的測量室頂部鉛蓋，蔣自動液體閃爍計數(shù)器改裝成一種發(fā)光分析儀改裝后的液體閃爍計數(shù)器既能測量發(fā)光強度，又能測量射線，且測量目射線性能不變。發(fā)光強度的測量性能與專用發(fā)光分析儀具有良好的相關性，且靈敏度高于專用發(fā)光分析儀。

 

關鍵詞：發(fā)光分析儀；液體閃爍計數(shù)器

 

目前，發(fā)光分析技術在生物醫(yī)學等領域得到越來越廣泛的應用，各種專用發(fā)光分析儀也相繼問世，但價格較貴。用于口射線測量的液體閃爍計數(shù)器，實際上是測量射線作用下閃爍體的發(fā)光，這種發(fā)光是一種穩(wěn)定的，而且是多光子的事件]。生物化學發(fā)光一般為瞬時的，且為單光子事件，它的發(fā)光值在反應物相互接觸的瞬時達到最大，然后迅速下降。因此，直接利用液體閃爍計數(shù)器測量生物化學發(fā)光受到了限制。

我們對液體閃爍計數(shù)器的測量室進行了改裝．改裝的液體閃爍計數(shù)器能與專用的發(fā)光分析儀一樣方便地加樣，解決了液體閃爍計數(shù)器不能及時加樣及時測量的問題，進而用于生物化學發(fā)光的測量。

 

將FJ一2115自動液體閃爍計數(shù)器(西安262廠生產)頂蓋打開，移去測量室頂都鉛蓋，裝上專門加工的帶有注射小孔的鉛蓋，并加用黑色橡皮墊圈，以避免光線透入。選擇相加測量方式，利用熒光素酶ATP發(fā)光體系對改裝的裝置進行測試：①用NaOH一甘氨酸緩沖液將熒光素酶(中科院上海植物生理研究所)配制成3．5mg／ml的濃度②將ATP標準(德國B．M公司)用Tris—HC1緩沖液稀釋成1×10 ^-8mol／L，l×10 mol／I，……1×10 ^-11mol／L的標準系列濃度。③分別取各標準液200uL加入發(fā)光管中。④將發(fā)光管送人測量室后．從注射孔注入800 uL熒光素酶溶液，測6s的發(fā)光值N。

 

2．1發(fā)光測量

將各標準液的6s發(fā)光值Ni減去本底值No，并取對數(shù)得：Yi=lg(Ni-No)，將濃度c取對數(shù)得：Xi=lgCi，以Yi為縱坐標，Xi為橫坐標作圖(圖1)。

 

FJ一2115的測量結果與LKB一1251(瑞典LKB公司生產的發(fā)光分析儀)的測量結果具有良好的相關性(r=098)，且FJ一2115的靈敏度略高于LKB1251。

2．2穩(wěn)定性

對同一濃度的ATP分別用IKB1251和改裝的FJ一2ll5液體閃爍計數(shù)器重復測量20次，其誤差分別為7．8和8．1，兩者結果相近．無顯著性差異。

2．3改裝的FJ一2115對B射線謝量的影響

改裝前。H的測量效率為51．2%．本底為15CPM，品質因素為58.25改裝后H的測量效率為51．1，本底為48CPM，品質因素為54.4。

 

 

液體閃爍計數(shù)器是用來測量p射線的專用儀器，有兩個光電倍增管，采用符合測量方式(即兩個光電管同時有信號時才給出信號．否則無信號輸出)。如果用它來測量諸如生物化學發(fā)光之類的單光子事件時，則需采用相加測量方式，這樣，其測量效率就比單光電倍增管的專用發(fā)光分析儀要提高一些，同時噪聲信號也會有所增加。本研究將自動液體閃爍計數(shù)器改裝成能及時加樣及時測量的發(fā)光分析儀，其測量性能與專用發(fā)光分析儀相近，有些指標還要好于專用發(fā)光分析儀。發(fā)揮了一機多能的作用，在不增加投資的條件下，為擁有液體閃爍計數(shù)

器的單位開展化學發(fā)光分析研究提供了方便。改裝后的液體閃爍計數(shù)器同樣可以測量p射線。

(來源：華中科技大學學報 舒柏華 張利平 徐順清）