原代細胞復蘇的基本操作方法

 

一、實驗準備

（1）儀器：凈化工作臺、離心機、恒溫水浴箱、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱、液氮冰箱

（2）玻璃器皿：吸管（彎頭、直頭）、培養(yǎng)瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、廢液缸

（3）塑料器皿：吸頭、槍頭、膠塞、移液管（10ml）、15ml離心管、凍存管（1～2ml）

（4）其他物品：微量加樣槍、紅血球計數(shù)板、記號筆、醫(yī)用橡皮膏、移液槍

（5）試劑：PBS、小牛血清、培養(yǎng)液、雙抗（青霉素、鏈霉素）、胰蛋白酶（0.08%）

 

二、操作步驟

（1）從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。

（2）從37℃水浴中取出凍存管，75％酒精消毒后，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管中。PriCells推薦接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

（3）離心，1000rpm，5min。PriCells推薦不離心。

（4）棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞，計數(shù)，調整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。PriCells推薦小牛血清濃度依據(jù)原代細胞種類。

（5）次日更換一次1／2培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

 

三、注意事項 

（1）將凍存管從液氮容器中取出時，要做好防護工作，以免凍傷。

（2）取出凍存管后立即放入水浴中，使其盡快融化（在1－2分鐘內）。

（3）復蘇最好用新配制的培養(yǎng)液。