原代細(xì)胞鑒定技術(shù)

二、免疫組織細(xì)胞化學(xué)鑒定
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片；
2. PBS清洗標(biāo)本3次，各1 分鐘；
3. 4%多聚甲醛固定15分鐘；
4. 置于空氣中干燥；
5. PBS清洗標(biāo)本3次，各2 分鐘；
6. 0.5%Triton X-100孵育 1次20分鐘；
7. PBS清洗標(biāo)本 3次 各2分鐘；
8. 3%H₂O₂孵育 15分鐘；
9. DPBS清洗標(biāo)本 3次 各2 分鐘；
10. 封閉血清孵育（5%正常二抗血清DPBS液20分鐘）
11. 一抗孵育，4℃ 過夜或37℃ 60 分鐘；
12. PBS清洗標(biāo)本3次 各5 分鐘；
13. 二抗工作液孵育（濕盒）37℃ 30 分鐘；
14. PBS清洗標(biāo)本3次 各5 分鐘；
15. C液（濕盒） 37℃ 30 分鐘；
16. PBS清洗標(biāo)本3次，各5 分鐘；
17. 用顯色液進(jìn)行顯色；
18. 蒸餾水洗滌2次1 分鐘；
19. 蘇木素復(fù)染1分鐘；
20. 清水洗滌30分鐘；
21. 光學(xué)樹脂封片后觀察。