離心分離PCR后樣品

 

用Hitachi CR—G離心機(jī)，R10H轉(zhuǎn)頭分離PCR后（DNA或其他生物大分子）樣品

A液：20％PEG6000，2.5M NaCl 及Isopropanol (異丙醇)

 

分離步驟：

1．用384孔板或96孔板，按比例增加容量，在PCR儀中擴(kuò)增反應(yīng)后

2．每孔內(nèi)含10ul PCR后樣品及10ul A液

3．微板先用搖床充分混勻。

4．對(duì)稱加入P10H轉(zhuǎn)頭（二塊或四塊，384孔板）

5．離心10,000rpm（約13,000xg）×10分，4℃，加速“9”，減速“9”

6．取出微孔板

7．用Kimtowels 紙貼在R10轉(zhuǎn)頭放微板架的內(nèi)壁

8．去掉微板蓋并把微板倒過(guò)來(lái)放入R10H 轉(zhuǎn)頭微板架。

9．預(yù)置轉(zhuǎn)速1000rpm，10分，4℃，加速“9”，減速“9”，在速度顯示到達(dá)300rpm時(shí)停車。

10．從微板中取出轉(zhuǎn)頭，沉淀可作出進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

 

特點(diǎn)：1. 轉(zhuǎn)速高（一般微板轉(zhuǎn)頭都在5000rpm，4000xg以下）回收率高。

      2. 沉淀緊，反向低速離心后上清全部被紙吸干。

      3. 用于DNA測(cè)序前樣品制備最合適。