哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞培養(yǎng)的β-半乳糖苷酶（分光光度測(cè)定）

                      哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞培養(yǎng)的β-半乳糖苷酶（分光光度測(cè)定）

試劑和器材： 
1.反應(yīng)緩沖液：5g/L聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）、0.05mol/L檸檬酸鈉-磷酸鹽緩沖液，pH4.3；
2.終止液：0.25%甘氨酸-NaOH，pH10；
3.底物：6mmol/L對(duì)硝基苯基-β-半乳呋喃糖苷溶于緩沖溶液中；
4.微量離心機(jī)，帶1.5—2.0ml小管；
5.分光光度計(jì)（可見波長(zhǎng)）帶1ml比色皿；

紫外-可見分光光度法測(cè)定酶活
酶活測(cè)定：以O(shè)NPG為底物測(cè)定β-半乳糖苷酶活力。
酶活定義：以O(shè)NPG為底物，37℃保溫酶解，每分鐘釋放lμmol／L鄰硝基酚的酶量，定義為1個(gè)酶活力單位。

實(shí)驗(yàn)方法：
1.每次檢測(cè)，將0.5ml底物與沉淀于微量離心小管中的膜組分或50μl膜的混懸液混合；
2.如第1步設(shè)置空杯樣，立即加入終止（緩沖液）1ml；
3.37℃孵育檢測(cè)液30min；
4.加入1ml的終止（緩沖液）到檢測(cè)液中；
5.在微量離心機(jī)中離心1—2min，去除任何沉淀物質(zhì)；
6.讀出在410nm波長(zhǎng)下檢測(cè)液相對(duì)于空白樣的吸光值；