原代細胞培養(yǎng)后過氧化物酶檢測

試劑和器材： 
1. 過氧化物儲存液：30mmol/L過氧化氫儲存在T-牛血清白蛋白（Tris-牛血清白蛋白溶液）中；
2. 樣品緩沖液：2體積的T-牛血清白蛋白溶液+1體積的2%（體積分數）Triton X-100；
3. 鈦氧硫化物（2.25g/L）溶于1mol/L硫酸中；
4. T-牛血清白蛋白：20mmol/L的Tris-HCl（pH7.0），含1g/L牛血清白蛋白；
5. 微量離心機，帶2.0ml微量離心管；
6. 分光光度計；

實驗方法：
   原代細胞培養(yǎng)后，所有操作都在2ml微量離心管中，置于冰上進行，所有溶液也保持在冰浴環(huán)境下。
1. 新鮮制備待測混合物，將8.5ml過氧化物儲存液用T-牛血清白蛋白溶液稀釋至100ml；
2. 向0.5ml測定混合物中加入1.0ml鈦氧硫化物，在405nm波長下測定吸光度，應該約為1.5.如果不是，就相應地調整過氧化氫的濃度；
3. 將10μl樣品與30μl樣品緩沖液相混合，反應對照液使用40μl樣品緩沖液；
4. 所有管子中都加入0.5ml待測混合物，每批只操作6管；
5. 準確計時1min后，加入1.0ml的鈦氧硫化合物，用微量離心機以13500g離心2min；
6. 所有管都在室溫達到平衡后在405nm波長處測量吸光度，空白樣含有0.54ml T-牛血清白蛋白和1ml鈦氧硫化合物；