GBT 18397-2001混合飼料中泛酸的測定高效液相色譜法

 

2.1 試驗溶液的制備

2.1.1 復合預A合飼料:稱取試樣1-2g 或維生素預混合飼料0.25-0.5g ,精確至0.0001g ，置于100mL棕色容量瓶中。加60mL水浸濕，搖勻，加10mLl%二乙胺四乙酸二鈉溶液(1.2)混勻，置于超聲波水浴上振蕩提15min。用水定容至刻度混合均勻。過濾或離心。再經(jīng)0.45 um過濾膜過濾，調整溶液的濃度大于1ug/mL，供高效液相色譜分析用。

2.1.2 濃縮飼料:稱取試樣2-5g ,精確至0.0001g,置于100m L棕色容量瓶中。加60m L水浸濕，搖勻，加10mLl%二乙胺四乙酸二鈉溶液棍勻，置于超聲波水浴上振裁提取15min。提取液若出現(xiàn)混濁，需用幾滴氫氧化鈉溶液(1.5)和鹽酸溶液(1.6)調節(jié)pH至4.5左右，至溶液澄清(用試紙顯示)沉淀蛋白質，用水定容至刻度，以下步驟同2.1.1。

注:當濃縮飼料每千克樣品中泛酸含量低于50mg時，可增加稱樣量.

2.2 測定

2.2.1 色譜條件

固定相 : ODS(C18)粒度5um。柱長150mm、內徑3.9mm不銹鋼柱。

移動相 : 磷酸緩沖液(1.3),

流速: 1. 0 m L/min

溫度:室溫。

進樣量: 10-20ul

檢測器: 紫外檢測器(或二極管矩陣檢測器PDA)使用波長200nm

2.2.2 定量測定

按高效液相色譜儀說明書調整儀器操作參數(shù)和靈敏度(AUFS)，色譜峰分離符合要求。用兩次以上相應標準工作液對系統(tǒng)進行校正，向色譜柱注入相應的泛酸或泛酸鈣的標準工作液〔1.4.2(Vst)」和試驗溶液「2.1(Vi)〕得到色譜峰面積響應值(Pst,Pi)，用外標法定量測定。

 

3.1 復合預混合飼料中泛酸的含量按式(1)計算:wi=Pi×V×pi×Vsi×f/Pm×m×Vi

wi一每千克試樣中泛酸的含量,mg;

m一試樣質量g;

V一提取液的總體積，ml;

pi一泛酸(或泛酸鈣)標準工作液濃度，ug/mL;

Vsi一泛酸(或泛酸鈣)標準工作液進樣體積，uL;

Vi一從試驗溶液中分取的進樣體積，uL;

Pm一與標準工作液進樣體積Vsi)相應的峰面積響應值;

Pi一與從試驗溶液中分取的進樣體積(Vi)相應的峰面積響應值;

f一轉換系數(shù)，用泛酸作標準物質時，系數(shù)為1;用泛酸鈣作為標準物質時轉換成泛酸，系數(shù)為0.920 (1 mg泛酸相當于1.087mg泛酸鈣)。

3.2 平行測定結果用算術平均值表示，保留小數(shù)點后一位。

每千克試樣中泛酸含量.mg            相對偏差%

50-2000                             ≤士10

 

復合預混合飼料中泛酸的測定，目前尚無國際標準可依，本標準是在查閱國內外文獻的基礎上，參考《美國全國飼料協(xié)會(NFIA)分析方法概要》報導的方法“高效液相色譜方法測定液體和固體多種維生素添加劑中抗壞血酸、煙酸、煙酞胺、泛酸鈣和泛醇的含量”而制定的。

本標準在技術內容上參考國外方法，其方法原理相同;對范圍、試樣提取條件、稱樣量、高效液相色譜測定條件進行了改進，并做了明確規(guī)定。該法簡便、快速、準確。

本標準由全國飼料工業(yè)標準化技術委員會提出并歸口。

本標準起草單位:國家飼料質量監(jiān)督檢驗中心(北京)。

本標準主要起草人:陳必芳、李蘭、林東下。