QuickAntibody免疫佐劑使用中已經(jīng)遇到的問(wèn)題以及答復(fù)

使用中已經(jīng)出現(xiàn)的問(wèn)題：

1、有客戶沒(méi)有仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，使用QuickAntibody佐劑時(shí)按照弗式佐劑方法與抗原進(jìn)行乳化等操作，并在4度冰箱放置過(guò)夜，第二日取出直接免疫，結(jié)果造成效價(jià)不理想。

答復(fù)：QuickAntibody佐劑無(wú)需乳化，而且無(wú)論是佐劑本身還是與抗原混合后，長(zhǎng)時(shí)間靜置均易產(chǎn)生沉淀，因此均需要搖勻后才能配制和注射。

2、有客戶沒(méi)有仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，使用QuickAntibody佐劑之前發(fā)現(xiàn)佐劑里面有沉淀成分，以為是污染物，離心去除，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果效價(jià)不理想。

答復(fù)：QuickAntibody佐劑產(chǎn)生沉淀為正常現(xiàn)象，只需在用前搖勻即可，若離心去除，必然影響免疫效果。

3、有客戶使用QuickAntibody佐劑免疫小鼠后腿小腿肚肌肉時(shí)，誤把踝關(guān)節(jié)當(dāng)成膝關(guān)節(jié)，從而使免疫部位太過(guò)偏下，免疫100ul的佐劑與抗原混合液時(shí)，大量液體流出。

答復(fù)：小鼠后腿大腿一般被腹部皮膚包裹，我們正常見(jiàn)到的后腿肌肉部分為小腿肌肉。另外若免疫至踝關(guān)節(jié)，由于免疫部位距離發(fā)生有效免疫應(yīng)答部位較遠(yuǎn)，抗原在擴(kuò)散至淋巴結(jié)前容易被降解，導(dǎo)致免疫應(yīng)答效率降低。

4、有客戶使用QuickAntibody佐劑免疫小鼠，因動(dòng)物較多，免疫時(shí)間較長(zhǎng)，最后佐劑在針管中沉淀在管壁，導(dǎo)致前面免疫的小鼠抗體效價(jià)較高，后面免疫的小鼠抗體效價(jià)較低。

答復(fù)：QuickAntibody佐劑易產(chǎn)生沉淀，建議在熟練使用之前，每次抽取較少量佐劑與抗原混合物進(jìn)行免疫（以二、三只小鼠用量為佳）；在操作熟練后，可以適當(dāng)增加免疫動(dòng)物的數(shù)量（如每抽取一次免疫五只以上小鼠）。

5、有客戶使用QuickAntibody佐劑制備單抗，抗原為多肽偶聯(lián)載體蛋白，免疫兩針后針對(duì)多肽的ELISA滴度僅為1:200，但是成功融合出4株雜交瘤細(xì)胞株，其中兩株產(chǎn)生的單抗可以做免疫組化，完全達(dá)到他們的預(yù)期結(jié)果！

答復(fù)：我們說(shuō)明書(shū)中所說(shuō)的效價(jià)為蛋白抗原免疫后的效價(jià)，對(duì)于多肽和小分子來(lái)說(shuō)，免疫后不可能達(dá)到如此高的滴度！原因是多肽和小分子為半抗原，本身只有一個(gè)表位或不足一個(gè)表位，而蛋白抗原有成百上千個(gè)表位。建議客戶檢測(cè)針對(duì)載體蛋白的ELISA滴度，如果達(dá)到說(shuō)明書(shū)滴度范圍，而且檢測(cè)到一定水平的多肽或小分子滴度，則表明免疫成功，完全可以繼續(xù)后續(xù)的融合工作。此時(shí)多肽或小分子滴度高低取決于該表位的免疫原性和偶聯(lián)效率，基本與佐劑無(wú)關(guān)！然而，與蛋白抗原相比，多肽或小分子單抗的陽(yáng)性克隆率則要低得多，因此客戶需要篩選更多的克隆。