ionKey/MS優(yōu)化血漿中緩激肽SPE LC-MS/MS定量檢測方法

Mary E. Lame，Erin E. Chambers，and Kenneth J. Fountain
Waters Corporation，Milford，MA，USA

應(yīng)用優(yōu)勢
■ 樣品量減少2倍、靈敏度提升10倍，可以方便進(jìn)行樣品的多次進(jìn)樣，更好的滿足ISR重復(fù)分析需求。
■ 溶劑耗量減少50倍，節(jié)省分析成本。
■ 采用混合模式SPE，可以減少基質(zhì)干擾，增強(qiáng)在血漿中緩激肽萃取的選擇性。
■ Oasis µElution96孔板可濃縮樣品，并在最大程度上減少肽損失，使血漿中緩激肽的檢測限達(dá)到5 pg/mL。
■ 選擇性高的快速SPE提�。�<30分鐘）省去了耗時的免疫親和純化步驟。

沃特世解決方案
ionKey/MS®系統(tǒng)
ACQUITY UPLC®M-Class
IonKey™源
Xevo® TQ-S
iKey™ 分離裝置
MassLynx™
Oasis®WCX 96孔µElution板
ACQUITY®采集板

引言
對多肽類物質(zhì)進(jìn)行穩(wěn)定、靈敏分析的需求是色譜分離和質(zhì)譜測定的共同挑戰(zhàn)。常見的肽通常難以通過LC-MS/MS進(jìn)行分析，這是因為其不易離子化以及不易產(chǎn)生理想的碎片離子而導(dǎo)致MS靈敏度較低，從而使得LC和樣品制備方法開發(fā)非常困難。之前的應(yīng)用紀(jì)要（720004833ZH）詳細(xì)說明了如何開發(fā)一種快速、靈活的SPE-LC-MS/MS分析方法，用于人血漿中緩激肽（圖1）的定量；緩激肽是臨床前或藥物開發(fā)階段重要的生物標(biāo)志物¹。由于緩激肽在血漿中的濃度低至pg/mL水平且代謝速度快，在采血和樣品制備過程中還可通過蛋白水解人為生成，因此對其進(jìn)行準(zhǔn)確定量相當(dāng)困難。

在本實驗中，使用ionKey/MS系統(tǒng)更新了整個LC-MS平臺，新系統(tǒng)把UPLC®分析集成到質(zhì)譜源中（圖2）。如圖3所示，iKey分離裝置（150 µm內(nèi)徑）包含流路、電子元件、ESI接口、加熱器、eCord和色譜填料以發(fā)揮UPLC分離性能。此外，與2.1 mm內(nèi)徑色譜法進(jìn)行比較，這種技術(shù)可顯著提高靈敏度，是肽分析的理想方法。大多數(shù)生物分析LC-MS/MS方法常常消耗大量的溶劑和樣品，從而增加了分析的成本和限制了可重復(fù)分析次數(shù)。除靈敏度增加外，ionKey/MS減少溶劑和樣品耗量，提供足夠的樣品進(jìn)行重復(fù)進(jìn)樣，更好的滿足ISR測試需求。

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