銳賽小課堂:
什么是MOI值?如何進(jìn)行MOI值摸索?
MOI(Multiplicity of Infection,感染復(fù)數(shù))是指病毒感染細(xì)胞的比例。選擇合適的MOI值,病毒的感染效率以及目的蛋白的表達(dá)量越高,相對細(xì)胞的毒性越小。對于分裂活躍的細(xì)胞,比如293細(xì)胞MOI=1時(shí),95%以上的細(xì)胞均可以表達(dá)目的基因。而對于非分裂細(xì)胞,比如原代細(xì)胞,感染效率較低,MOI值可能達(dá)到200-300。我們建議通過比較不同MOI(比如0、1、5、10、50、100等)感染細(xì)胞的結(jié)果,選擇適合的MOI進(jìn)行實(shí)驗(yàn):可以先將培養(yǎng)好的細(xì)胞接種至96孔板,然后用攜帶報(bào)告基因EGFP的陰性對照病毒,按照不同MOI值比例感染細(xì)胞,進(jìn)行MOI值摸索。
可以對miRNA的成熟序列進(jìn)行慢病毒包裝嗎?
可以,請?zhí)峁﹎iRNA的成熟序列的序列信息即可。我們將進(jìn)行miRNA過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及包裝、滴度檢測及miRNA的qPCR檢測,詳情可見miRNA病毒包裝服務(wù)內(nèi)容。
包裝好的病毒在使用中要注意哪些安全性問題?
病毒的使用要求在生物安全標(biāo)準(zhǔn)2級(jí)(BL2)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行,操作人員穿工作服、戴口罩及一次性乳膠手套。操作時(shí)應(yīng)在指定的區(qū)域內(nèi)使用II級(jí)生物安全柜;操作時(shí)動(dòng)作盡量輕柔,避免產(chǎn)生氣溶膠和飛濺;含有病毒的廢液和用具可用121℃高壓滅菌30分鐘;使用銳器(如注射器、刀片)時(shí)務(wù)必要小心。
訂制的腺病毒產(chǎn)品接收后如何保存和使用?
我們采用干冰特快專遞方式將病毒遞送到客戶手中?蛻羰盏胶,應(yīng)注意以下幾點(diǎn):
1)確認(rèn)泡沫塑料盒中的干冰仍有剩余,冰盒內(nèi)保持低溫;2)確認(rèn)泡沫塑料盒內(nèi)物品與發(fā)貨樣本清單一致,腺病毒產(chǎn)品包裝完整,沒有破碎、滲漏;3)公司提供分裝好的腺病毒產(chǎn)品,短時(shí)間內(nèi)不使用請凍存于-70℃超低溫冰箱中。半年內(nèi)使用完畢。4)凍存于-80℃超低溫冰箱中的腺病毒產(chǎn)品使用前取出,冰上融解,盡快使用。如果解凍后的病毒暫時(shí)用不完,滴度足夠高時(shí)(比如10^11-12 IU/ml),4℃可保存1~2周。