九大測序平臺對比

1.sanger

企業(yè)：Life Technology

推出時間：1977年發(fā)明，1986年第一臺商業(yè)化測序儀

主流型號：3730XL

樣品要求：PCR產物：濃度≥50ng/ul 體積≥10ul；質粒：含量≥5ug；菌液：體積≥1ml。

測序原理:

雙脫氧鏈終止法：Sanger法測序的原理就是，每個反應含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)使之擴增，并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)使之終止。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基團，使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止，終止點由反應中相應的雙脫氧而定。每一種dNTPs和ddNTPs的相對濃度可以調整，使反應得到一組長幾個至千以上個，相差一個堿基一系列片斷。它們具有共同的起始點，但終止在不同的的核苷酸上，可通過高分辨率變性凝膠電泳分離大小不同的片段，凝膠處理后可用X-光膠片放射自顯影或非同位素標記進行檢測。

文庫制備:無需建庫，提供質粒、菌液、PCR產物等均可以

模板制備:PCR擴增

讀長:500-1000bp

測序通量:

四種測序方式的每天通量：

短片段測序36cm36min500bp 1,728,000bp/day；

快速測序36cm60min700bp 1,440,000bp/day；

標準測序36cm90min800bp 1,113,000bp/day；

長片段測序50cm120min1100bp 1,002,000bp/day。

(36cm指毛細管長度，36min指一次反應時間，500bp指一個反應的讀長；)

時間/run:36 min-2 hours

堿基精確度:99.999%

變異檢測能力(DNA重測序方面):

heterozygous insertions and deletions,microsatellite, SNP, AFLP, T-RFLP,and LOH analyses

AFLP：擴增片段長度多態(tài)性(Amplified Fragment Length Polymorphism),；

T-RFLP：限制性片段長度多態(tài)性（terminal restriction fragment length polymorphism）；

LOH analyses：雜合性缺失（Loss of Heterozygosity）；

成本:$95,000 per machine, about $4 per reaction, 800bp per reaction,

數據格式:*.bcf ； *.abl

分析軟件:

數據收集軟件Data Collection v2.0 (隨機提供)

Manages your instrument setup, controls instrument operations, allows real-time data visualization, and performs diagnostics. New features include:

- Auto-analysis with GeneMapper® v3.5 and SeqScape® v2.1

- FDA 21CFRpart 11 compliance (for US customers)

- Flexibility to use any choice in dye set option

- Additional optimized sequencing run modules covering more applications

序列分析軟件Sequencing Analysis v5.1

Designed to base-call; assign quality values; trim, display, edit and print DNA sequencing data using the KB basecaller

序列拼接和比較基因分析軟件Seqscape® v2.1

Provides everything you need to perform resequencing applications such as VariantSEQr™ Resequencing System

自動化基因片段分析軟件GeneMapper® v3.5

Enables configurable, automated allele calling -- a plus for high-throughput genotyping and includes tools for SNPlex™ data analysis

SNP分型數據管理軟件BioTrekker™ v1.0 (optional data-mining tool)

Provides a fast, powerful way to search for, retrieve, and manage millions of genotypes

優(yōu)點:測序金標準，讀長長

缺點:通量低，成本高

經典案例:Sanger測序屬于測序技術的金標準，文章眾多

備注:鑒于測序本身方法的局限，測序引物后10bp～40bp無法保證準確

2.454

企業(yè): Roche

推出時間: 2005年

主流型號: Genome Sequencer FLX Titanium（2008年推出）

樣品要求: 5 μg of DNA，濃度≥300 ng/μL

測序原理：焦磷酸測序

在測序時，使用了一種叫做“Pico TiterPlate”（PTP）的平板，它含有160多萬個由光纖組成的孔，孔中載有化學發(fā)光反應所需的各種酶和底物。測序開始時，放置在四個單獨的試劑瓶里的四種堿基，依照T、A、C、G的順序依次循環(huán)進入PTP板，每次只進入一個堿基。如果發(fā)生堿基配對，就會釋放一個焦磷酸。這個焦磷酸在各種酶的作用下，經過一個合成反應和一個化學發(fā)光反應，最終將熒光素氧化成氧化熒光素，同時釋放出光信號。此反應釋放出的光信號實時被儀器配置的高靈敏度CCD捕獲到。有一個堿基和測序模板進行配對，就會捕獲到一分子的光信號；由此一一對應，就可以準確、快速地確定待測模板的堿基序列。

文庫制備：Fragment(300-800 bp), Mate-pair

模板制備：微乳液PCR

讀長：400bp

測序通量：0.4-0.6 Gb/run

時間/run：10 hours

堿基精確度：Q20讀長為400個堿基

變異檢測能力(DNA重測序方面：SNP, Indel, SV, CNV

成本：儀器$500,000/臺，測序$5,600 per whole plate

數據格式：Raw data：SFF格式

分析軟件：GS De Novo Assembler軟件；GS Reference Mapper軟件；GS Amplicon Variant Analyzer軟件

優(yōu)點：突出優(yōu)勢是讀長長，使得后繼的序列拼接工作更加高效、準確。速度快，一個測序反應耗時10個小時，獲得4-6億個堿基對。

缺點：無法準確測量同聚物的長度，所以檢測插入缺失突變的誤差率高；通量小且費用高。

經典案例：1.Complete Khoisan and Bantu genomes from southern Africa.Schuster SC et al. (2010) Nature 463(7283): 943-7.

(更多詳見https://www.roche-applied-scienc ... ng/genome/index.jsp)

備注：特別適合從頭拼接和宏基因組學應用，多用于新的細菌基因組。對重測序來說太貴，不適合

3.Solid

企業(yè): Life Technology(2008年，ABI與Invitrogen合并為Life Technology公司)

推出時間: 2007年

主流型號: Solid™4.0（2010年推出）

樣品要求:

• Fragment文庫10 ng-5 μg

•Paired-end文庫10 ng-5 μg

•Mate-paired文庫5 μg-20 μg

測序原理: 邊連接邊測序

測序引物與接頭可以互補雜交，其5‘端可與和鄰近序列互補的寡核苷酸相連。八聚體寡核苷酸可競爭性與引物相連接（該寡聚體的第四位和第五位為熒光標記位點）。當其標記顏色被讀取后，即將連接上的寡核苷酸在第五位和第六位之間切斷，以移除標記，進行下一輪反應，以此依次循環(huán)。在第一輪反應中，可以得到確定的堿基位點為：4、5、9、10、14、15位堿基等。重復該反應過程，偏移一位堿基，使用較第一輪少一個堿基的引物進行反應，可以確定的堿基位點包括：3、4、8、9、13、14等，如此往復，直至偏移至引物的第一個堿基（即待測序列0位點堿基）。由于該位點堿基已知，可通過讀取的熒光顏色得知位點1的堿基類型，然后，又以位點1堿基熒光顏色推知位點2的堿基類型，依此類推，直至整個序列讀序完成。

文庫制備:

• Mate-paired 文庫 (插入片段 600 bp to 10 Kb)

• Paired-end 文庫

• Fragment 文庫

模板制備: 微乳液PCR

讀長: 2*50 bp

測序通量: 100-120 Gb/run, 12G/day

時間/run: 7~12 days

堿基精確度: 原始堿基數據的準確度大于99.94%，而在15X覆蓋深度時的準確度可以達到99.999%

變異檢測能力(DNA重測序方面): SNP, Indel, SV, CNV

成本: 儀器$495,000/臺，測序$6000/100Gb

數據格式: Raw data: *csfasta和*quel；比對輸出格式：BAM/SAM。

分析軟件: 分析軟件：Bioscope,比對后格式有很多第三方軟件支持

優(yōu)點: 高準確性，每個DNA堿基檢測2次，增加了序列讀取的準確性

缺點: 運行時間長，檢測堿基替換突變的誤差率高

經典案例: SOLiD測序技術僅在DNA應用發(fā)表的文章共60篇，包括發(fā)表在Science/Nature及其子刊上的高水平文章15篇，其中de nove sequencing文章3篇，targeted resequencing文章26篇，whole genome resequencing文章31篇。SOLID在RNA和表觀等文章應用也同樣廣泛。

備注: 行業(yè)領先的準確性實現了重要的生物變異檢測，適合全基因組重測序、定向重測序和全轉錄組分析等應用。

4.HiSeq2000

企業(yè): Illumina

推出時間: 2010/1/1

主流型號: Illumina HiSeq2000

樣品要求: 6ug/sample,無RNA、蛋白污染，無降解，OD260/OD280=1.8-2.0

測序原理: 邊合成邊測序

這種測序技術通過將基因組DNA的隨機片斷附著到光學透明的表面，這些DNA片斷通過延長和橋梁擴增，形成了具有數以億計cluster的Flowcell，每個cluster具有約1000拷貝的相同DNA模板，然后用4種末端被封閉的不同熒光標記的堿基進行邊合成邊測序。這種新方法確保了高精確度和真實的一個堿基接一個堿基的測序，排除了序列方面的特殊錯誤，能夠測序同聚物和重復序列。This technology attach random fragment of genome DNA to optically transparent surface.And by extention bridge amplification of the DNA fragments,it create a flow cell with > 10 million clusters, each containing ~1,000 copies of same template. Then sequence by synthese using four kind of terminal-closed base with different fluorescent mark. This technology assures the high accuracy and one by one base sequencing, avoids special mistakes of sequence and can be applied for repeated sequence and homopolymer.

文庫制備: Fragment, Mate-pair (200bp-40kb)

模板制備: 橋式擴增

讀長: 50SE,91PE,101PE 等

測序通量: 25G/day

時間/run:

91/101PE, 8-10 days ;

50SE, 3 days;

150PE, 15 days;

總體來說，策略不同，時間也有差別

堿基精確度: Q30%≥80%；Q20%≥90%

變異檢測能力(DNA重測序方面): SNP、Indel、SV、CNV

成本: $690,000 per machine , $6000 per human genome sequencing(30X)

數據格式: 測序結果：*.fq;比對：*。SOAP/*.BAM/*.SAM;變異：*.gff

分析軟件: GenomeStudio或者第三方軟件包；自主選擇

優(yōu)點: 通量大，測序方式靈活，分析軟件多樣化

缺點: 在成本上目前高于第三代測序，樣本制備過程復雜，樣本要求相對 較高。

經典案例: Initial genome sequencing and analysis of multiple myeloma.Chapman MA,et al.Nature. 2011 Mar 24;471(7339):467-72.

Cytoplasmic intron sequence-retaining transcripts can be dendritically targeted via ID element retrotransposons.Buckley PT,et al.Neuron. 2011 Mar 10;69(5):877-84.

Identification of fusion genes in breast cancer by paired-end RNA-sequencing.Edgren H,et al. Genome Biol. 2011 Jan 19;12(1):R6.

Genome-wide association mapping to candidate polymorphism resolution in the unsequenced barley genome.Cockram J,et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010 Dec 14;107(50):21611-6. Epub 2010 Nov 29.

MHC class II transactivator CIITA is a recurrent gene fusion partner in lymphoid cancers.Steidl C, et al.Nature. 2011 Mar 17;471(7338):377-81. Epub 2011 Mar 2.

Tumour evolution inferred by single-cell sequencing.Navin N,et al.Nature. 2011 Apr 7;472(7341):90-4. Epub 2011 Mar 13.

備注: 是目前市場上最主流的測序儀器，demo case眾多；另外，The additional benefit is experimental flexibility- applications that require different read lengths can be run on each flowcell – an example is that a whole genome sequencing and de novo sequencing study (eg. Of human and microorganism) could be run on one flowcell at 2 x 100bp reads, and the other could be running ChIP-seq and gene expression samples at 1 x 50bp read length. Each flowcell is controlled independently; hence, a run can be started/stopped independent of the other.

5.Helicos

企業(yè): Helicos Biosciences

推出時間: 2008年

主流型號: HeliScope™ Single Molecule Sequencer（2008年推出）

樣品要求: 1-3 μg，起始DNA體積不超過100 μL.

測序原理: 邊合成邊測序,可逆阻斷測序

待測DNA被隨機打斷成小片段，在每個小片段（~200 bp）的末端加上poly-dA，并于玻璃芯片上隨機固定多個poly-dT引物，其末端皆帶有熒光標記，以利于精確定位。首先，將小片段DNA模板與檢測芯片上的poly-dT引物進行雜交并精確定位，然后逐一加入熒光標記的末端終止子。這個終止子與Illumina的終止子可不一樣，不是四色的，是單色的，也就是說所有終止子都標有同一種染料。在摻入了單個熒光標記的核苷酸后，洗滌，單色成像，之后切開熒光染料和抑制基團，洗滌，加帽，允許下一個核苷酸的摻入。通過摻入、檢測和切除的反復循環(huán)，即可實時讀取大量序列。最后以軟件系統(tǒng)輔助，可分析出完整的核酸序列。

文庫制備: Fragment, Mate-pair

模板制備: 單分子檢測

讀長: 25-55 bp，平均35 bp

測序通量: 21 to 35 Gb/run

時間/run: 8 days

堿基精確度: >20X覆蓋度時一致性超過99.995%

變異檢測能力(DNA重測序方面): SNP, CNV

成本: 儀器$999,000/臺，測序$0.45-0.60/Megabase.

數據格式: Raw data：srf或者sms格式

分析軟件: 推薦用Helisphere開放資源軟件進行過濾比對

優(yōu)點: 真正的單分子測序，無需前期擴增，不引入偏向性;特別適合RNA-Seq或RNA直接測序的應用，因為它能直接測序RNA模板，而無需將其轉化成cDNA。檢測堿基替換突變的誤差率非常低，~0.2%。

缺點: 錯誤率高，Insertion 1.5%，Deletion 3.0%；Heliscope在面對同聚物時也會遇到一些困難，但可以通過二次測序提高準確度；由于在合成中可能摻有未標記的堿基，因此其最主要的錯誤來源是缺失。

經典案例: 1.Single-molecule sequencing of an individual human genome.

Dmitry Pushkarev,Norma F Neff & Stephen R Quake.Nat Biotechnol, 27. (9): 847-852.

(更多詳見http://www.helicosbio.com/HeliSp ... id/169/Default.aspx)

備注: 特別適合RNA-Seq或RNA直接測序的應用

6.DNA Nanoball array

企業(yè): Pacific Biosciences

推出時間: 2009年底Science論文發(fā)表,2010年推出

主流型號: DNA Nanoball array

樣品要求: DNA 由

PicoGreen定量：推薦10ug，最少7.5ug。濃度:75-150ng/ul;體積：50-200ul;DNA長度：大分子量雙鏈基因組DNA，大部分超過20kb.

測序原理: 邊連接邊測序

采用了高密度DNA（玻璃板）納米芯片技術和非連續(xù)、非連鎖聯(lián)合探針錨定連接（cPAL）技術來進行測序�；�因組隨機打斷成500bp隨機長度的片段，兩端接上接頭，成環(huán)，限制性內切酶酶切，重復2次，最終連接成一個DNA環(huán)，現階段4接頭建庫方法能夠支持70bp單端測序（35bp雙端測序）。接著，所示，每個DNA環(huán)在反應液中高速擴增，形成一個納米球（DNB），這樣每一個DNA環(huán)大約擴增了200次。然后把這些納米球平鋪到預先處理過的玻璃板上，形成納米芯片。最后通過非連鎖聯(lián)合探針錨定連接（cPAL）技術進行測序，10bp長的探針上有一個錨定堿基（A or T or G or C），其他位置都是N，通過與模板的雜交連接反應，根據4種不同的堿基（A/T/G/C）會有四種不同的熒光信號，總共需要40種不同的錨定探針。每一種錨定探針雜交之后都會進行洗脫。通過DNB芯片的熒光顯影結果及解碼分析，我們可以確定每個DNB的核酸序列。

文庫制備: 500bp

模板制備: 納米球（DNB）

讀長: 35PE

測序通量: 20-60G/run/flow slide,共18 個flow slide

時間/run: 9 days

堿基精確度: 99.999%

變異檢測能力(DNA重測序方面): SNP、Indel、SV、CNV

成本: 只提供測序服務，不出售儀器。09年11月的WGS成本為$1726 （45×），$8005 （87×）

數據格式: 基礎文本格式，*.tsv�？山桓督Y果包括：序列變異、功能注釋、數據總結報告 及一整套上述結果的支持數據。

數據由三部分組成，主要部分是reads和mappings，其次是assambly 和variations，summary report最少

分析軟件: Genome comparison tools、Format conversion tools、Annotation tools、Reference tools，在開發(fā)中的還有用于癌癥基因組分析的腫瘤-正常樣本比對工具和用于家族基因組分析的工具，還有大規(guī)模比對工具可以同時比對數百個基因組。Complete Genomics Assembly Pipeline version 1.5.0

優(yōu)點: 測序自動化，成本低，通量大

缺點: 讀長短，分析軟件不公開，樣品要求高

經典案例: Identification by whole-genome resequencing of gene defect responsible for severe hypercholesterolemia. Jonathan Rios, et al. Human Molecular Genetics, Volume19, Issue22 Pp. 4313-4318.

Human Genome Sequencing Using Unchained Base Reads on Self-Assembling DNA Nanoarrays.Radoje Drmanac1,et al. Science, Vol. 327 no. 5961 pp. 78-81 .

Analysis of Genetic Inheritance in a Family Quartet by Whole-Genome Sequencing. Jared C. Roach,et al. Science, Vol. 328 no. 5978 pp. 636-639

The mutation spectrum revealed by paired genome sequences from a lung cancer patient.William Lee,et al.Nature ,Volume:465, Pages: 473–477

備注: mapping reads：40X/genome

7.The PacBio RS system

企業(yè): Pacific Biosciences

推出時間: 2010年2月開始早期試用

主流型號: PacBio RS

樣品要求: 1kb以下500ng，純化的基因組 DNA, BACs, cDNA 文庫 或PCR 產物

測序原理: 邊合成邊測序，single molecule, real-time, or SMRT™, technology

這項技術的核心在于使用了Zero-Mode Waveguide(ZMW)(零波段邊界)。測序的平臺上有幾萬個小井，單個DNA聚合酶和要測序的DNA鏈固定在每一個小井里。帶有熒光標記的脫氧核苷酸(A,T,C,G)被加入到每個小井里。每一種脫氧核苷酸在激化后分別能放出不同波長的熒光。小井的底部開了一個非常小的孔，小到比探測激光的單個波長還要短。根據我們的常識，這個孔太小了，激光無法從井的底部穿過去，從而無法激發(fā)脫氧核苷酸上的熒光物質。應此，底部的顯微鏡檢測到的是一片黑暗。但是我們知道光線是一種波，它會衍射，激光雖然不能完全穿過小孔照亮整個小井，但它能透過小孔而勉強照亮小孔附近很小的一個區(qū)域。而DNA聚合酶正好被固定在這個小區(qū)域。當有單個脫氧核苷酸加載在DNA聚合酶上形成新的化學鍵時，這個脫氧核苷酸上的熒光物質被激活而發(fā)光，從而被顯微鏡觀測到。這種特定顏色的熒光只持續(xù)一小段時間，應為這個堿基在DNA鏈上合成之后，它的熒光基團就會被剪切掉，從而繼續(xù)下一個堿基的合成。當DNA鏈合成結束之時也是DNA鏈測序完成之時。但DNA聚合酶的活性會在激光照射下逐漸減弱，不能無限長度的進行合成反應，因此DNA鏈的測序長度也是有限的。

文庫制備: Fragment, Mate-pair (250bp-6kb)

模板制備: SMRTbell™ library, 無需常規(guī)擴增，1kb以下的文庫只需要500ng樣品

讀長: 1000bp

測序通量: 高靈活性的測序通量

時間/run: 模板制備到 primary basecall analysis只需不到一天,一般只需要不到4個小時.

堿基精確度: 準確率社會評價不高，2011年1月發(fā)表的NEJM雜志（關于海地霍亂的測序）在其supplementary提到它的單堿基準確率只有81-83%。

關于其準確率的社會評價不好，有網站稱其準確度很差，單次測序平均錯誤率15%，循環(huán)測序后降至8%

變異檢測能力(DNA重測序方面): SNP、Indel、SV、CNV，可以直接進行甲基化等修飾測序，方便表觀研究

成本: $700,000 per machine，$99 per SMRTTMCell, each patterned with 15,000ZMW, each ZMW contain a single DNA polymerase.

數據格式: bas.h5 – Base File and Filtered Bases File - Documentation

cmp.h5 – Reference Mapped File and Consensus File - Documentation

分析軟件: mapping：BLASR (Basic Linear Alignment with Successive Refinement)；組裝：ALLORA (A Long Read Assembler)；SNP 和Indel ： RCCS (Reference Circular Consensus Sequencing) 客戶端軟件：SMRT Portal；提供：experiment specific, data-rich reports in industry-standard output formats containing both primary and secondary analysis data�？梢允褂玫谌�方軟件。

優(yōu)點: 讀長長；無需PCR擴增，也避免了由此帶來的bias；需要的樣品量很少；樣品制備時間花費少；用RS系統(tǒng)可以遠程快速獲取數據和選擇測序參數；通量靈活；時間快

缺點: 準確性低，需要循環(huán)測序，

經典案例: The Origin of the Haitian Cholera Outbreak StrainChen-Shan Chin,et al.N Engl J Med 2011; 364:33-42January 6, 2011.

Real-Time DNA Sequencing from Single Polymerase Molecules.John Eid, et al.Science 2 January 2009:

Vol. 323 no. 5910 pp. 133-138

DOI: 10.1126/science.1162986

備注: 1.在樣品制備好后，有一個run design的步驟，可以在客戶電腦上用RS remote 軟件來自主選擇運行方式和后續(xù)的個性化分析服務，以及第一時間接受測序數據2.截止2011年5月份已正式發(fā)售了多臺RS測序儀，其中包括美國國家生化防衛(wèi)分析與對策中心（NBACC）和冷泉港實驗室。

8.PGM

企業(yè): Ion Torrent

推出時間: 2010年

主流型號: Ion Personal Genome Machine™（2010年）

樣品要求: 5 μg DNA，起始DNA體積不超過130μL

測序原理: 半導體芯片測序

該測序儀使用了一種高密度半導體小孔芯片。該芯片置于一個離子敏感層和離子感受器之上，每當有核苷酸分子被摻入時就會釋放出質子，而離子感受器就會感受到這種信號，知道是哪一個核苷酸被摻入，從而讀出DNA序列。

文庫制備: Fragment(185–210 bp)

模板制備: PCR擴增

讀長:

314芯片，100 bp；

316芯片，100bp；

318芯片，200 bp。

測序通量:

314芯片，10 Mb/run；

316芯片，100 Mb/run；

318芯片，1Gb/run。

時間/run: 2 hours

堿基精確度: 一致性超過99.99%，>99.5% raw accuracy.

變異檢測能力(DNA重測序方面): SNP, Indel

成本: 儀器$50,000 /臺，測序$500/run

數據格式: 標準的SFF或者FASTAQ格式

分析軟件: 一系列商業(yè)軟件進行變異檢測，denovo組裝

優(yōu)點: 無以倫比的快速，2個小時完成測序工作；Ion Torrent的化學測序原理自然簡單，無修飾的核苷酸、無激光器或光學檢測設備，因而可達到極小的測序偏差和出色的測序覆蓋均衡度。

缺點: 測序通量目前還不夠大，增加半導體芯片的容量將有望提高測序儀的處理能力。

經典案例: 1德國大腸桿菌疫情爆發(fā)之后，華大基因利用第三代測序儀——Ion Torrent進行了該大腸桿菌的全基因組測序。在獲得病毒樣本后三天的時間內，華大基因完成了對該新型大腸桿菌的基因組測序。經過初步信息分析，發(fā)現該菌株是一種新的兼具侵襲、產毒、腸出血等特征的大腸桿菌。

備注: 特別適合微生物基因組測序及擴增子重測序

9.MiSeq

企業(yè): Illumina

推出時間: 2011年

主流型號: MiSeq Personal Sequencing System（2011年）

樣品要求: 使用Nextera，50 ng DNA；使用TruSeq，100 ng–1 μg DNA

測序原理: 邊合成邊測序

這種測序技術通過將基因組DNA的隨機片斷附著到光學透明的表面，這些DNA片斷通過延長和橋梁擴增，形成了具有數以億計cluster的Flowcell，每個cluster具有約1000拷貝的相同DNA模板，然后用4種末端被封閉的不同熒光標記的堿基進行邊合成邊測序。這種新方法確保了高精確度和真實的一個堿基接一個堿基的測序，排除了序列方面的特殊錯誤，能夠測序同聚物和重復序列。

文庫制備: Fragment

模板制備: 橋式擴增

讀長:

1*35 bp

2*100 bp

2*150 bp

測序通量:

1*35 bp >120 Mb/run

2*100 bp >680 Mb/run

2*150 bp >1 Gb/run

時間/run:

擴增測序總時間：

1*35 bp 4 hours

2*100 bp 19 hours

2*150 bp 27 hours

堿基精確度:

>90% bases higher than Q30 at 1*35 bp

>80% bases higher than Q30 at 2*100 bp

>75% bases higher than Q30 at 2*150 bp

變異檢測能力(DNA重測序方面):

成本: N/A

數據格式: 儀器$125,000/臺，測序$750/run

分析軟件: *.bcl, FASTQ, BAM, *.vcf和*.csv.

優(yōu)點: 樣品制備簡單快速，在一臺儀器上完成測序和數據處理；可靠的化學方法，可逆中止堿基邊測序邊合成法

缺點: N/A

經典案例: N/A

備注: 特別適合擴增子測序、克隆檢查和小基因組測序

來源：生物文摘