薄層原位反射光譜定量方法的研究

薄層掃描法定量分析多采用反射法,漫反射光的行為復(fù)雜,儀器光路較復(fù)雜;以反射吸光度定量分析,僅適用于低濃度范圍,線性范圍較窄;以單波長或雙波長采集數(shù)據(jù),數(shù)據(jù)量小,精密度低,而多波長掃描儀器價(jià)格較昂貴。因此,迫切需要提高薄層掃描儀的光學(xué)分辨率、調(diào)整光路減少雜散光的影響、降低薄層色譜掃描儀設(shè)備成本以及對(duì)定量分析方法進(jìn)行研究。

研究主要包括以下四個(gè)方面內(nèi)容:

(1)構(gòu)建薄層原位反射光譜的測(cè)試系統(tǒng),以“弓”形二維移動(dòng)方式掃描斑點(diǎn),設(shè)置間隔記錄時(shí)間記錄斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)位置多個(gè)波長下的光度響應(yīng)值。以非那西丁和咖啡因?yàn)榉治鰧?duì)象,結(jié)果表明非那西丁斑點(diǎn)點(diǎn)樣量在2.00-24.00μg范圍內(nèi),反射吸光度和K-M函數(shù)值與斑點(diǎn)點(diǎn)樣量的線性相關(guān)系數(shù)r分別為0.9805和0.9990,將斑點(diǎn)點(diǎn)樣量范圍縮小到2.00-10.00μg和8.00-24.00μg,線性關(guān)系均達(dá)0.9933以上,與反射吸光度相比,K-M值與斑點(diǎn)點(diǎn)樣量線性相關(guān)性更好。

考察速度掃描對(duì)定量分析的影響,咖啡因斑點(diǎn)面積上的K/S值隨掃描速度增加而減小,掃描速度在0.962-3.282mm/s范圍內(nèi)對(duì)K-M值與斑點(diǎn)含量的線性關(guān)系影響不顯著。

(2)以綠原酸為分析對(duì)象,考察薄層原位反射光譜法分析的準(zhǔn)確度。以斑點(diǎn)采集對(duì)應(yīng)點(diǎn)位置與光強(qiáng)度響應(yīng)的關(guān)系識(shí)別薄層定量分析的誤差來源;在波長230.49–374.00nm范圍內(nèi),斑點(diǎn)面積上K-M值與綠原酸含量的線性相關(guān)系數(shù)r=0.9995;薄層色譜掃描儀以金銀花提取液為背景,加樣回收實(shí)驗(yàn),回收率為100.67%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.61%(n=7),表明該方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度,可滿足定量分析的需求。

(3)建立多波長薄層原位反射光譜法測(cè)定金銀花中綠原酸含量的方法。以含水量為75%微乳液和甲酸(6:1)為展開劑,在聚酰胺薄膜上分離金銀花提取液中的綠原酸。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,斑點(diǎn)面積上K-M值與綠原酸含量有良好的線性關(guān)系,以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算金銀花中綠原酸的含量為4.983mg/g,RSD為2.35%(n=6),平均回收率為98.87%,RSD為2.90%,檢出限為19ng。高效液相色譜法測(cè)得金銀花中綠原酸含量為5.158mg/g。本法測(cè)得結(jié)果與高效液相色譜結(jié)果基本一致。

(4)對(duì)金銀花提取液薄層色譜分離過程行為進(jìn)行了分析探索是薄層色譜描儀的應(yīng)用。

經(jīng)薄層分離后,金銀花提取液在聚酰胺薄膜上出現(xiàn)10個(gè)斑點(diǎn),提取分離斑點(diǎn)色譜峰上的光譜圖;對(duì)薄層分離過程進(jìn)行分析,為薄層色譜展開條件的優(yōu)化提供研究基礎(chǔ)。

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