原代細胞培養(yǎng)中的六個錯誤做法【賽百慷原創(chuàng)】

原代細胞培養(yǎng)與細胞株不同，兩者在培養(yǎng)過程中的操作方法也不一樣。這里對原代細胞操作過程中容易出現(xiàn)的6個錯誤及對應方法做一個說明。

1.長時間水浴解凍

因為原代細胞非常容易受到解凍過程的影響，所以在37℃水浴鍋中解凍時，要在水中擺動溶解。在細胞半溶后（不要等到全部溶解），迅速拿到生物安全柜或超凈臺中，用1ml的槍，抽出事先準備好的完全培養(yǎng)基打入凍存管中，然后抽到培養(yǎng)瓶中，反復進行，直至完全溶解

2.把凍存管的細胞溶解后迅速離心
如果原代細胞溶解后馬上離心，細胞所受的打擊可能比DMSO的毒性還要大，不建議采用這個方法。用帶有血清的完全培養(yǎng)基溶解后鋪瓶，第二天換液去除DMSO。

3.讓原代細胞長滿（100%）瓶（皿、板）
原代細胞長滿后，細胞會出現(xiàn)老化。因為原代細胞不是100%的細胞團，把混入的細胞控制在最小限度非常重要。建議細胞長到90-95%進行傳代

4.傳代時用大量的胰蛋白酶處理
原代細胞傳代時，要用低濃度的胰蛋白酶消化，在顯微鏡下看到細胞開始變圓、脫落后迅速終止胰蛋白酶。建議采用含10%血清的完全培養(yǎng)基終止或大豆由來的蛋白酶終止劑終止。

5.細胞培養(yǎng)后再凍存
原代細胞再凍存后，細胞會老化、也可能引起機能變化，所以不建議再凍存。細胞再凍存也是細胞死傷的主要原因。

6.原代細胞無限增殖

原代細胞和細胞系不同，增殖能力是有限的。為了防止遺傳上的變化，最好盡快開始做實驗。另外，為了防止混入雜細胞比例的增加，要經(jīng)常觀察細胞形態(tài)。