層析填料裝柱的注意事項

裝柱前要仔細看填料的使用說明書，每種填料都有自己的特性，以及特殊的裝柱方法，針對不同的空柱，也要注意方法可能不同。

1、裝柱前要仔細看填料的使用說明書，每種填料都有自己的特性，以及特殊的裝柱方法，針對不同的空柱，也要注意方法可能不同;

2、填料要加水攪拌成均勻懸液，懸液濃度依填料而不同，一般70-85%，迅速倒入空柱內(nèi)，或吸或壓，流速和具體步驟看說明書。

3、這一點非常重要：裝柱包括以后使用中絕對不允許柱內(nèi)進入氣泡(bubble free)，柱頭事先也要排除氣泡。

4、選擇合適的泵，首先是流速滿足要求，脈沖盡量小。首選柱塞泵。

5、所有柱子盡量做到填料均勻，尤其是用于凝膠層析的柱子。裝柱完成后，可用柱效測定的方法檢

查裝填效果。一個裝填合格的柱子的理論塔板高度應(yīng)是填料平均粒徑的2-4 倍，在此范圍內(nèi)越小越好

6、準備上柱的液體應(yīng)進行過濾，至少是0.45micrometre。

7、至于測序，我想大概不到1mg 應(yīng)該足夠了。

8、關(guān)于純化，首先要考慮的是你的目標：純度、數(shù)量、速度、收率等等，再根據(jù)樣品的具體情況，尤其是目標蛋白的性質(zhì)，確定純化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。第一步先從大量或復(fù)雜樣品中將目標蛋白“抓出”，與主要雜質(zhì)分離;再用高選擇性的層析去除絕大部分雜質(zhì);最后精細純化，提供純度至設(shè)定目標。到實際工作中，不要死靠三步，也許一步也許四步或更多，具體情況具體分析。所謂“三步”只是一種思路而已。