IAC-SEP®雙酚A免疫親和柱使用說(shuō)明書IAC316

IAC-SEP^®雙酚A免疫親和柱

                               （產(chǎn)品編號(hào)：IAC316）    

使用對(duì)象

IAC-SEP^®雙酚A親和柱能夠特異性的純化樣品中的雙酚A，它采用了柱狀瓊脂糖凝膠作為固相載體，瓊脂糖凝膠與雙酚A抗體偶聯(lián)形成免疫吸附劑，裝柱制成免疫親和柱。它能夠特異性的純化樣品中的雙酚A。雙酚A親和柱廣泛地應(yīng)用于飲料、牛奶和奶粉，尿液等樣品的提取，該方法速度快、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高，對(duì)提高食品的質(zhì)量和安全性起到十分重要的作用。

原理

雙酚A免疫親和柱能夠特異性的純化樣品中的雙酚A，將樣品與提取液混合、提取、過(guò)濾，然后將濾液通過(guò)雙酚A親和柱。此時(shí)，雙酚A物質(zhì)鍵合在親和柱中的抗體上。用蒸餾水將免疫親合柱上的雜質(zhì)除去。用甲醇通過(guò)分離柱，將雙酚A從抗體上分離下來(lái)。最后，將過(guò)濾的甲醇溶液注入HPLC或LC-MS進(jìn)行測(cè)定。

儲(chǔ)存條件

該親和柱保存在2-8 °C條件下，絕對(duì)不能冷凍，保質(zhì)期為18個(gè)月。建議在室溫（18-30°C）下使用。

實(shí)驗(yàn)溶液制備

  pH7.4 PBS溶液：8.0 克NaCl + 2.90克Na₂HPO4 12H₂O + 0.24 克 KH₂PO4 + 0.2克KCl  加990mL純水溶解，加純水至1升。

液相色譜條件

色譜柱：Cloversil-C18,4.6×250mm（5um）

流動(dòng)相：甲醇:水=70:30（v/v）

流速：1.0 mL/min

檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)227nm， 發(fā)射波,313nm

進(jìn)樣體積：20uL

分析步驟

1. < >：牛奶：準(zhǔn)確量取牛奶樣品20mL于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入20.0 mL純水，混勻，然后4000 RPM離心10min。準(zhǔn)確移取吸取下層液20.0 mL，備用。

    

奶粉：稱取 5 g(精確至0.01 g)試樣，置于250 mL 燒杯中。將50mL 已預(yù)熱到50 ℃的水加入到乳粉中，用玻璃棒將其混合均勻。如果乳粉仍未完全溶解，將燒杯置于50℃的水浴中放置30 min。溶解后冷卻至20 ℃，移入100 mL 容量瓶中，用少量的水分次洗滌燒杯，洗滌液一并移入容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。準(zhǔn)確移取吸取下層液20.0 mL，備用。

嬰幼兒米粉: 稱取 6 g(精確至0.01 g)試樣，置于50 mL 離心管中。準(zhǔn)確加入30.0 mL 60%乙腈水，混勻，震蕩提取30min。然后4000 RPM離心10min，將上層液體用普通濾紙過(guò)濾。準(zhǔn)確量取濾液10mL于100mL錐形瓶中，加入50mL純水稀釋混勻，備用。

飲料：準(zhǔn)確量取樣品25mL于50mL容量瓶中，調(diào)節(jié)PH值7-8左右， 用 pH7.4 PBS溶液定容至50mL，準(zhǔn)確移取吸取下層液40.0 mL，備用。

1. < >牛奶,奶粉（測(cè)定范圍：牛奶樣品0-50μg/L，奶粉樣品0-500μg/kg）

    

   將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取20.0mL樣品提取液注入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2mL/min（1滴/秒）流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體。以2-3mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0mL水淋洗柱子1次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體。準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min（1滴/秒），收集全部洗脫液于玻璃試管中， 50 °C下氮?dú)鉂饪s吹干后，用流動(dòng)相定容至0.5 mL，供HPLC或LC-MS分析。

    

   飲料（測(cè)定范圍： 0-25μg/L）

   將免疫親和柱連接于50.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取40.0mL樣品提取液注入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2mL/min（1滴/秒）流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體。以2-3mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0mL水淋洗柱子1次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體。準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min（1滴/秒），收集全部洗脫液于玻璃試管中， 50 °C下氮?dú)鉂饪s吹干后，用流動(dòng)相定容至0.5 mL，供HPLC或LC-MS分析。

    

   嬰幼兒米粉:（測(cè)定范圍：0-100μg/kg）

   將免疫親和柱連接于50.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取全部60.0mL樣品提取液注入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2mL/min（1滴/秒）流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體。以2-3mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0mL水淋洗柱子1次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體。準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min（1滴/秒），收集全部洗脫液于玻璃試管中， 50 °C下氮?dú)鉂饪s吹干后，用流動(dòng)相定容至0.5 mL，供HPLC或LC-MS分析。

   注：為了節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間，可以省去氮?dú)獯蹈傻牟襟E，將1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫液直接注入HPLC檢測(cè)（前提是液相色譜儀條件允許），因此，檢測(cè)靈敏度會(huì)降低2倍。

    

   注意事項(xiàng)

2. < >< >< >< >。

   C/N編號(hào)

   物品

   21022

   Clover六位泵流操作架（配有1臺(tái)空氣泵，6個(gè)10mL針筒）

   20202

   高速勻質(zhì)器，轉(zhuǎn)速可達(dá)18,000 r/min ~22,000 r/min

   31955

   美國(guó)vicam微纖維濾紙（1.5um，100張/盒）

   31240

   折疊式槽紋濾紙（100張/盒），或中速定性濾紙

   36010

   一次性塑料燒杯(25/包)

   34000

   一次性測(cè)試管(250支/包)

   36020

   塑料漏斗(10 個(gè)/包)

   35016

   色譜純級(jí)的甲醇（4升/瓶）

   C546150-U

   Cloversil  C18 反相色譜柱4.6*150mm（5um）

   C546250-U

   Cloversil  C18 反相色譜柱4.6*250mm（5um）,資料索要qq1609095159