“膜” 法學(xué)院之晉階篇--解鎖超濾實(shí)用小技能

是否提供無(wú)熱源的超濾管

建議用Turbo系列，用1N NaOH溶液室溫浸泡1小時(shí)，3000g離心，棄去剩余溶液。在使用無(wú)熱源水3000g沖洗兩次注意，賽多利斯超濾離心管系列，只有Turbo可以進(jìn)行上述操作，而其他材質(zhì)的膜，要考慮對(duì)NaOH的耐受性。比如，相對(duì)于RC膜，經(jīng)過(guò)NaOH處理后，將會(huì)影響過(guò)濾速度和回收效果。

需要濃縮到一定的倍數(shù)？其實(shí)可以通過(guò)超濾管控制

首先，Vivaspin超濾管有最小回收體積，保證至少回收30ul的樣本，并且不會(huì)讓過(guò)長(zhǎng)的離心時(shí)間導(dǎo)致樣品離干。另外，如果需要濃縮一定的倍數(shù)，使用超濾管也可以直接完成，不需要另外的步驟。首先，預(yù)先計(jì)算外管液體達(dá)到濾過(guò)孔的刻度線的位置需要的體積，然后減去樣品要濾出的體積，就是需要預(yù)先加入外管的緩沖液的體積。先在外管中加入計(jì)算得到的緩沖液，待濾出液的體積流入外管緩沖液中，使液面達(dá)到濾出孔，則樣品不再濃縮，濃縮倍數(shù)得到了固定，看，樣品濃縮就是那么簡(jiǎn)單！

可以用超濾管分離外泌體嗎

答案是可以的，除此之外核酸，納米微球顆粒，多糖，病毒都可以用超濾的方法，而且超濾不會(huì)破壞外泌體的結(jié)構(gòu)。對(duì)于外泌體，推薦使用過(guò)濾設(shè)備進(jìn)行雜質(zhì)去除（Minisart或Sartolab RF/BT系列），然后用超濾設(shè)備（Vivaspin或Vivaflow系列）進(jìn)行外泌體的濃縮。具體步驟如下：

a) 收集培養(yǎng)液，離心去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片后，使用0.2um針頭式濾器（Minisart系列，適合1-100mL樣品）或正壓/負(fù)壓過(guò)濾器（Sartolab RF/BT系列，適合100-15,000mL樣品）過(guò)濾去除囊泡等大顆粒物質(zhì)

b) 樣品使用Vivaspin超濾管（≤20mL），Vivacell超濾杯（20-250mL），或vivaflow 膜包（100ml-5L）超濾制備外泌小體。

其實(shí)已經(jīng)有很多前輩用Vivaspin超濾管收集外泌體了，參考文獻(xiàn)：

【1】Robert Gastpar, Mathias Gehrmann,Maria A. Bausero,Heat Shock Protein 70 Surface-Positive Tumor Exosomes Stimulate Migratory and Cytolytic Activity of Natural Killer Cells, Cancer Res 2005; 65: (12). June 15, 2005, 5238-5247

【2】M. Lucrecia Alvarez, Mahdieh Khosroheidari, Rupesh Kanchi Ravi and Johanna K. DiStefano, Comparison of protein, microRNA, and mRNA yields using different methods of urinary exosome isolation for the discovery of kidney disease biomarkers, Kidney International (2012) 82, 1024–1032; doi:10.1038/ki.2012.256; published online 11 July 2012

最后要補(bǔ)充的是，超濾是大分子脫鹽、濃縮最方便的方法！它重復(fù)性好，已經(jīng)在蛋白、抗體、病毒、外泌體、核酸、囊泡等樣品制備中建立標(biāo)準(zhǔn)操作。所以，聽(tīng)說(shuō)真正會(huì)用正確使用超濾管的文化人都在用賽多利斯的兼具年代感和時(shí)尚feel的超濾管啦！快點(diǎn)來(lái)看看我們?cè)敿?xì)的說(shuō)明，選擇一款你順手合心的濃縮神器吧！

Vivaspin超濾管系列具有專(zhuān)利的尖角死體積樣品安全保護(hù)技術(shù)，防意外甩干，給珍貴的樣品更多一道保障！另外，根據(jù)蛋白的分子量和體積的不同，Vivaspin系列有多達(dá)24種不同選擇。樣品處理體積包括從100μl到20ml，截留分子量也涵蓋了2KDa到0.2um。

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