3種常用基因功能驗(yàn)正方法簡(jiǎn)述

科研人員在分析項(xiàng)目的過程中，碰到這樣的問題：通過各種手段（選擇清除分析、比較基因組學(xué)分析、轉(zhuǎn)錄組分析）獲得的行駛某種功能的某基因，如果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)正呢？一般分為：基因上調(diào)（基因轉(zhuǎn)染法）、基因下調(diào)（基因干擾法）后看蛋白表達(dá)水平、細(xì)胞功能改變、在體動(dòng)物模型中相關(guān)功能的變化等。
 

相信大家也有人有這樣的疑惑，輝駿生物就以上問題進(jìn)行有針對(duì)性的收集了如下的資料，希望可以幫助到您。
 

1、 RNA 干擾技術(shù)

RNA干擾（RNA interference, RNAi）是指在進(jìn)化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發(fā)的、同源mRNA高效特異性降解的現(xiàn)象。由于使用RNAi技術(shù)可以特異性剔除或關(guān)閉特定基因的表達(dá)，所以該技術(shù)已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的治療領(lǐng)域。

簡(jiǎn)單的說如果某基因行駛控制花色為紅的功能（舉例），我們利用RNA干擾技術(shù)將這個(gè)基因轉(zhuǎn)錄的mRNA 降解掉，然后看花色的變化，如果不為紅，說明這個(gè)基因的確有這個(gè)作用。

 

2、 基因敲除技術(shù)

基因敲除是自80年代末以來發(fā)展起來的一種新型分子生物學(xué)技術(shù)，是通過一定的途徑使機(jī)體特定的基因失活或缺失的技術(shù)。通常意義上的基因敲除主要是應(yīng)用DNA同源重組原理，用設(shè)計(jì)的同源片段替代靶基因片段，從而達(dá)到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術(shù)的發(fā)展，除了同源重組外，新的原理和技術(shù)也逐漸被應(yīng)用，比較成功的有基因的插入突變和iRNA，它們同樣可以達(dá)到基因敲除的目的。

 

3、 酵母雙雜交

酵母雙雜交系統(tǒng)是將待研究的兩種蛋白質(zhì)的基因分別克隆到酵母表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄激活因子（如GAL4等）的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域基因和轉(zhuǎn)錄激活因子（如GAL4等）激活結(jié)構(gòu)域基因，構(gòu)建成融合表達(dá)載體，從表達(dá)產(chǎn)物分析兩種蛋白質(zhì)相互作用的系統(tǒng)。
 

由于蛋白質(zhì)直接互作是蛋白質(zhì)發(fā)揮調(diào)控作用的重要方式，如果要研究某個(gè)基因行駛某功能，可以將這個(gè)基因和靶基因都整合到酵母中進(jìn)行互作研究，從而分析其功能。


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