GITR靶點(diǎn)分子和B-hTNFRSF18（GITR）小鼠

各位看官晚上好，一期一會(huì)的百奧賽圖知識(shí)擴(kuò)展課堂又來(lái)嘍，今天小編帶來(lái)一種視覺(jué)享受的分子，言歸正傳，GITR（glucocorticoid-induced TNFR-related protein）是TNF受體超家族成員 ，在多種腫瘤模型中可表現(xiàn)出抗腫瘤效果。GITR是目前免疫學(xué)家感興趣的一種共刺激免疫檢查點(diǎn)分子。

那么接下來(lái)，咱們就一起瞧瞧這個(gè)因吹斯汀的靶點(diǎn)分子吧~

 

基因功能簡(jiǎn)介

TNFRSF18（TNF受體超家族成員18）也稱為糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNFR相關(guān)蛋白（GITR），其在包括T細(xì)胞在內(nèi)的許多免疫細(xì)胞上表達(dá)。作為T細(xì)胞的共同刺激信號(hào)，TNFRSF18在T細(xì)胞活化后被上調(diào)，進(jìn)而促進(jìn)T細(xì)胞增殖。已知CD25⁺/CD4⁺調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可介導(dǎo)免疫耐受，而GITR激動(dòng)劑抗體可逆轉(zhuǎn)這種免疫耐受，并在多種腫瘤模型中顯示出抗腫瘤作用。

 

 

Figure 1：Model of GITR–GITRL interaction dynamics during an immune response.

 

目前，GITR是免疫學(xué)家熱衷研究的共刺激檢查點(diǎn)分子，參與抑制Treg細(xì)胞的抑制活性，并延長(zhǎng)效應(yīng)T細(xì)胞的存活。百奧賽圖開(kāi)發(fā)的B-hTNFRSF18(GITR) mice人源化小鼠為科學(xué)家們研發(fā)該靶點(diǎn)抗體藥物的有效驗(yàn)證提供了有力的工具。

 

品系信息

 

 

qRT-PCR分析

 

通過(guò)qRT-PCR技術(shù)分析肝臟組織的的GITR基因在 mRNA水平的表達(dá)情況。

在C57BL/6與B-hGITR小鼠中，GITR基因表達(dá)并無(wú)顯著性差異(n=3)。

 

蛋白表達(dá)分析

   

通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-hGITR小鼠的脾細(xì)胞。

在WT C57BL/6中可檢測(cè)到小鼠GITR⁺細(xì)胞，而在純合B-hGITR小鼠中可檢測(cè)到人GITR⁺細(xì)胞。

 

通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-hGITR小鼠的Treg細(xì)胞。

在WT C57BL/6中可檢測(cè)到小鼠GITR⁺細(xì)胞，而在純合B-hGITR小鼠中可檢測(cè)到人GITR⁺細(xì)胞。

 

B-hGITR小鼠的白細(xì)胞亞群分析

 

從C57BL/6和B-hGITR小鼠（n=3）中分離出脾細(xì)胞。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)試白細(xì)胞亞群的比例。 

結(jié)果表明，純合B-hGITR小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hGITR的人源化不影響T，B，NK，粒細(xì)胞，單核細(xì)胞，DC和巨噬細(xì)胞的分化。

 

從C57BL/6和B-hGITR小鼠（n=3）中分離出脾細(xì)胞。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)試白細(xì)胞亞群的比例。 

結(jié)果表明，純合B-hGITR小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hGITR的人源化不影響CD45細(xì)胞中mCD4、mCD8以及T細(xì)胞中mCD4、mCD8的分化。

 

GITR抗體藥效驗(yàn)證

 

將鼠結(jié)腸癌MC38細(xì)胞皮下植入雜合的B-hGITR小鼠中。

 

當(dāng)腫瘤尺寸為約150±50mm³（n＝6）時(shí)，將小鼠分組。三種人GITR抗體以不同方式抑制腫瘤生長(zhǎng)，證實(shí)B-hGITR小鼠模型是體內(nèi)GITR抗體藥理功效研究的有力工具。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

將鼠結(jié)腸癌MC38細(xì)胞皮下植入純合的B-hGITR小鼠中。

 

當(dāng)腫瘤尺寸為約150±50mm³（n＝5）時(shí)，將小鼠分組。兩種人GITR抗體以不同方式抑制腫瘤生長(zhǎng)，證實(shí)B-hGITR小鼠模型是體內(nèi)GITR抗體藥理功效研究的有力工具。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

B-hPD-1/hGITR mice

 

蛋白表達(dá)分析

通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-PD-1/GITR小鼠的脾細(xì)胞。

在WT C57BL/6小鼠中僅可檢測(cè)到小鼠PD-1⁺ T細(xì)胞，而在純合B-hPD-1/GITR小鼠中可檢測(cè)到人PD-1⁺ T細(xì)胞。

通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-PD-1/GITR小鼠的脾細(xì)胞。

在WT C57BL/6小鼠中僅可檢測(cè)到小鼠GITR⁺ T細(xì)胞，而在純合B-hPD-1/GITR小鼠中可檢測(cè)到人GITR⁺ T細(xì)胞。

 

B-hPD-1 / GITR小鼠的白細(xì)胞亞群分析

  

脾臟白細(xì)胞亞群分析

 

從C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠（n=3）中分離出脾細(xì)胞。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)試白細(xì)胞亞群的比例。 

結(jié)果表明，純合B-hPD-1/GITR小鼠中白細(xì)胞亞群的表達(dá)譜與C57BL/6小鼠相似，hPD-1/hGITR的人源化不影響T，B，NK，單核細(xì)胞，DC和巨噬細(xì)胞的分化。

血液常規(guī)測(cè)試

 

 

血液常規(guī)測(cè)試

 

收集來(lái)自C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠（n=3）的血液，并通過(guò)血液常規(guī)測(cè)試進(jìn)行分析。結(jié)果，MCV中的C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠之間存在顯著差異。

 

血液生化測(cè)試

   

測(cè)試了C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠的血清AST/ALT水平（n=3）。結(jié)果表明，C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠之間沒(méi)有顯著差異。

 

PD-1 Ab聯(lián)合治療與GITR Ab療效評(píng)估-1

   

將鼠結(jié)腸癌MC38-hPD-L1細(xì)胞皮下植入純合B-hPD-1/hGITR小鼠中。當(dāng)腫瘤大小為大約100-150mm³（n＝5）時(shí)，將小鼠分組。與對(duì)照組相比，所有實(shí)驗(yàn)組均顯示出明顯的抑制作用。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。 

 

PD-1 Ab聯(lián)合治療與GITR Ab療效評(píng)估-2

   

將鼠結(jié)腸癌MC38-hPD-L1細(xì)胞皮下植入純合B-hPD-1/hGITR小鼠中。當(dāng)腫瘤大小為大約100-150mm³（n＝5）時(shí)，將小鼠分組。與對(duì)照組相比，所有實(shí)驗(yàn)組均顯示出明顯的抑制作用。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

參考資料

Ethan M Shevach, Geoffrey L. The GITR–GITRL interaction: co-stimulation or contrasuppression of regulatory activity?  Nature Reviews Immunology 6: 613–618 (2006)，dol:10: 1038/nri1867