Azure在假病毒研究的應(yīng)用

新發(fā)和再發(fā)傳染病對公共衛(wèi)生造成了嚴(yán)重影響。然而，由于這些病原體例如新冠COVID-19，SARS必須在3或4級別生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行處理，因此抗病毒藥或疫苗的研發(fā)常常受到阻礙。人們一直在積極尋求解決這一問題的替代方法，其中使用假病毒代替野生型病毒，是一種很好的手段。
 

假病毒是一種重組病毒顆粒，其核心/骨架和包膜蛋白來源于不同的病毒。假病毒內(nèi)部的基因通常被改變或修飾，使得它們不能自行產(chǎn)生表面蛋白。假病毒能夠感染易感細(xì)胞，但是它們僅在感染的宿主細(xì)胞中復(fù)制1輪。與野生型（WT）病毒相比，假病毒可以在2級的生物安全處理級別的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理，更易于操作。假病毒被廣泛用于細(xì)胞病毒感染機(jī)制，受體識別研究，以及疫苗開發(fā)和評估中和抗體等。
 

由于假病毒通常經(jīng)過工程改造以攜帶報(bào)告基因，因此對這些病毒進(jìn)行定量分析比對WT病毒容易得多。在研究假病毒時(shí)通常使用qPCR檢測構(gòu)建的假病毒的病毒滴度，使用Western blot鑒定假病毒是否表達(dá)等。
 

例如由北京大學(xué)健康科學(xué)中心微生物與傳染病中心，在《Plos One》發(fā)表的《Development and Evaluation of a Pseudovirus-Luciferase Assay for Rapid and Quantitative Detection of Neutralizing Antibodies against Enterovirus 71》的文章中使用qPCR的方法對構(gòu)建的假病毒滴度進(jìn)行檢測，qPCR方法可以更加準(zhǔn)確地測定病毒滴度和病毒感染效率。更精準(zhǔn)的定量可以選擇Naica微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)。
 

由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所和河南科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與獸醫(yī)學(xué)院在《JVS》上發(fā)表的《Packaging of Rift Valley fever virus pseudoviruses and establishment of a neutralization assay method》的文章中，使用Western blot方法對構(gòu)建的假病毒進(jìn)行鑒定，實(shí)驗(yàn)顯示兩個(gè)特異性條帶，分子量約為65 kDa和56 kDa，分別與RVFV G1和G2蛋白的大小一致。陰性對照組未見特異性條帶。這些結(jié)果表明，目的蛋白的表達(dá)是正確的。western blot檢測結(jié)果均表明所得到的RVFV假病毒含有RVFV G1和G2蛋白，證實(shí)了假病毒的成功構(gòu)建。
 

Azure IRIS^TM實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)來自于美國Azure Biosystems公司，融合了高品質(zhì)PCR溫度模塊和卓越的熒光檢測系統(tǒng)，為您的科學(xué)研究提供高精準(zhǔn)、高靈敏可靠結(jié)果。
 

產(chǎn)品特性：

◐ 數(shù)據(jù)可靠性——連續(xù)1000次實(shí)驗(yàn)，結(jié)果高度一致。

◐ 應(yīng)用靈活性——提供多種qPCR應(yīng)用分析。

◐ 流程智能化——觸控屏和直觀用戶界面，操作簡單，可多機(jī)聯(lián)用。

◐ 在線便捷性——主機(jī)可獨(dú)立運(yùn)行qPCR程序，數(shù)據(jù)可USB、Wi-Fi等網(wǎng)絡(luò)傳輸。
 

連續(xù)運(yùn)行1000輪qPCR實(shí)驗(yàn)（GAPDH定量）Cq值。

在Azure IRIS上，連續(xù)運(yùn)行1000輪qPCR實(shí)驗(yàn)（GAPDH定量），每輪96個(gè)反應(yīng)，

并連續(xù)計(jì)算Cq值的平均值和Cq值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。Cq值=22.4±0.01
 

選擇western blot檢測方法時(shí)，使您不再受限于成像系統(tǒng)。熒光檢測方法具備出色的定量檢測和多重檢測能力�；瘜W(xué)發(fā)光檢測具備絕佳的靈敏度，適用于低豐度蛋白檢測；Azure Biosystems試劑開放，您可以任選方法、任選試劑獲取數(shù)據(jù)。
 

產(chǎn)品特性：
 

◐ 雙紅外檢測-激光光源658nm和784nm，較LED光源和白光光源靈敏度更高，信噪比更好。

◐ 同時(shí)4通道熒光成像，配合AzureRed熒光蛋白染色試劑進(jìn)行全蛋白定量，更符合期刊雜志數(shù)據(jù)要求。

◐ 快速高靈敏化學(xué)發(fā)光檢測，具有多種曝光方式可供選擇，包括快速自動(dòng)采集，寬動(dòng)態(tài)范圍采集，低豐度樣品長時(shí)間采集，累積曝光，多重曝光等。

◐ 彩色Marker成像，分子量查看更直觀。

◐ 2min完成制冷，即插即用。

◐ 符合21 CFR Part 11。

參考文獻(xiàn)：

1. Yuetao Li，Yongkun Zhao etc. Packaging of Rift Valley fever virus pseudoviruses and establishment of a neutralization assay method. J Vet Sci2018, 19(2), 200-206 https://doi.org/10.4142/jvs.2018.19.2.200

2. Qianqian Li etc. Current status on the development of pseudoviruses for enveloped viruses. Rev Med Virol.2017;e1963.

https://doi.org/10.1002/rmv.1963

3. Eva Chand etc .evelopment of a Moloney Murine LeukemiaVirus–Based Pseudotype Anti-HIV Assay Suitable for Accurate and RapidEvaluation of HIV Entry Inhibitors. Journal of Biomolecular Screening 11(6);2006DOI: 10.1177/1087057106288881