液相色譜柱現(xiàn)有技術(shù)總結(jié)

填料做為色譜技術(shù)的核心，一直是色譜研究中最豐富、最有活力、最富于創(chuàng)造性的研究方向之一。經(jīng)常使用色譜柱的您知道硅膠鍵是如何相互作用的嗎？

要搞明白這個(gè)問(wèn)題，我們要先明白色譜柱的結(jié)構(gòu)。
 

 

結(jié)構(gòu)
 

色譜柱由接頭、螺帽、柱管、填料、墊圈及過(guò)濾片等組成，其中填料為色譜柱的核心部分，科研工作者在填料上發(fā)揮奇思妙想，開(kāi)發(fā)出市面上種類(lèi)繁多的色譜柱，每種色譜柱又有其獨(dú)特的選擇性及應(yīng)用。

 

常用的色譜柱填料基質(zhì)為硅膠，硅膠作為基質(zhì)有如下優(yōu)點(diǎn)：
 

硅膠填料通式

根據(jù) R3 基團(tuán)的不同，可將色譜柱分為不同的類(lèi)型。 
 

B：二官能團(tuán)鍵合：增加載樣量及方法穩(wěn)定性
 

1、空間位阻

普通的色譜柱在 pH ＜2 時(shí)不穩(wěn)定，發(fā)生水解，導(dǎo)致鍵合相流失。當(dāng)我們用異丙基、二異丁基來(lái)取代甲基的話，就在鍵合相上形成一個(gè)保護(hù)層，這樣不僅能抗水解能力（pH1-8），還能防止分離化合物與硅羥基之間的作用，改善峰型。
 

 

2、極性嵌入

在碳鏈上鍵合了極性基團(tuán)，流動(dòng)相在該基團(tuán)處形成了水「屏蔽」層媒介，水層間接屏蔽了帶負(fù)電的硅羥基與目標(biāo)分離物接觸可能性，減少與酸、強(qiáng)堿性化合物的吸附，減少了拖尾現(xiàn)象的產(chǎn)生，大大地改善了色譜峰型對(duì)稱(chēng)性。
 

 

另外，極性嵌入可降低「脫水」（ 疏水塌陷）危險(xiǎn)，即使在含水量高的流動(dòng)相條件下，樣品也同樣有穩(wěn)定保留和最佳峰形。
 

疏水塌陷：普通的 HPLC 色譜柱在有機(jī)溶劑含量低甚至 100% 水流動(dòng)相條件下，一旦流速停止，推動(dòng)水溶液流動(dòng)相進(jìn)入硅膠孔隙的壓力減小，當(dāng)壓力降低時(shí)，疏水的微孔表面排斥極性流動(dòng)相，便會(huì)發(fā)生鍵合相孔隙脫水，從而導(dǎo)致所謂的「疏水塌陷」，對(duì)化合物的保留能力大大減弱。  

 

 

3、雙層表面修飾

在硅膠新增加表面層硅羥基活性更低的新硅羥基 pH5.2（普通硅羥基 pH 約為 3.5），低表面硅羥基活性，抑制二次保留 。
 

 

 

核殼型色譜柱對(duì)儀器的柱外死體積要求高、且柱容量小于全多孔色譜填料，因而并不適用于大規(guī)模的制備液相分離需求。