新時(shí)代下對(duì)于Western Blotting發(fā)表文章的新要求（三）

在《J Proteomics》期刊雜志中2020年2月刊發(fā)了《40 years Western blotting: A scientific birthday toast》的文章綜述，其中指出Western blotting已經(jīng)有40多年的歷史，仍然是現(xiàn)在單一蛋白常用的分析技術(shù)，但因?yàn)槠鋽?shù)據(jù)重復(fù)性、穩(wěn)定性和定量的精準(zhǔn)性引起科研界的關(guān)注，其數(shù)據(jù)可以通過(guò)研究方法的進(jìn)步，儀器的提升，期刊雜志的對(duì)數(shù)據(jù)新要求的變化，使Western blotting數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性和精準(zhǔn)度都有所提高。

那我們看看期刊雜志對(duì)提交的Western blotting數(shù)據(jù)都做了哪些要求：
 

1. 不建議跑平行膠，因?yàn)槠叫心z和剝離膜，孵育體系，操作條件的不一致，影響定量的準(zhǔn)確性，因此最好內(nèi)參和目的蛋白要在同一張印跡膜上。

2. 選擇寬動(dòng)態(tài)范圍的方法，確認(rèn)信號(hào)強(qiáng)度與所上樣量之間的線性關(guān)系，例如用膠片做化學(xué)發(fā)光方法的動(dòng)態(tài)范圍就很窄，不建議使用。

數(shù)字成像相比膠片動(dòng)態(tài)范圍更寬，定量更準(zhǔn)確
 

3. 強(qiáng)烈推薦使用總蛋白進(jìn)行歸一化，因?yàn)榭醇业鞍兹菀资芴幚項(xiàng)l件影響而發(fā)生變化，影響定量的結(jié)果，使用總蛋白定量更真實(shí)地反映目標(biāo)蛋白表達(dá)量的變化。
 

4. 提交原始數(shù)據(jù)，例如：JBC，PLOS和CELL等雜志都要求要提供原始數(shù)據(jù)。

對(duì)于化學(xué)發(fā)光為主，經(jīng)費(fèi)預(yù)算又有限的用戶，Azure同樣給出一個(gè)適合的配置，那就是Azure300Q：

♣ Azure300Q帶有Q模塊，可激發(fā)AzureRed等染料進(jìn)行全蛋白定量，最后化學(xué)發(fā)光條帶和總蛋白條帶同時(shí)在一張膜上成像，滿足Nature，JBC等期刊雜志的總蛋白定量要求，幫助用戶發(fā)表文章。

♣ 同時(shí)Q模塊還可以激發(fā)例如Cy3,AzureSpectra550,AlexaFluor546,Qdot565，羅丹明等染料，還可以做熒光內(nèi)參與化學(xué)發(fā)光條帶同時(shí)在一張印跡膜上成像，熒光動(dòng)態(tài)范圍更寬，相比于傳統(tǒng)的化學(xué)發(fā)光內(nèi)參定量更準(zhǔn)確。

熒光內(nèi)參和化學(xué)發(fā)光同時(shí)成像

♣ Azure300Q標(biāo)配9.1MP的高分辨CCD，動(dòng)態(tài)范圍可達(dá)4.8OD，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

過(guò)飽和檢測(cè)可防止定量誤差，相同的印跡膜分別使用膠片成像和Azure成像系統(tǒng)，

Azure成像系統(tǒng)具有過(guò)飽和提醒，自動(dòng)計(jì)算曝光時(shí)間以避免飽和。
 

♣ Azure300Q可進(jìn)行自動(dòng)彩色Marker與化學(xué)發(fā)光條帶的整合，符合期刊雜志中不過(guò)度裁剪Marker的要求，分子量查看更直觀。

彩色Marker與化學(xué)發(fā)光條帶成像
 

♣ Azure300Q成像系統(tǒng)提供16bit的tiff原始圖，將更真實(shí)的數(shù)據(jù)給到客戶，保證結(jié)果的真實(shí)性和可靠性。
 

♣ Azure300Q還可以做考馬斯亮藍(lán)染色的蛋白膠、核酸膠、銀染膠等成像。