草魚(yú)呼腸孤病毒3型PCR檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品名稱：草魚(yú)呼腸孤病毒3型PCR檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Grass Carp Reovirus(GCRV)3RTPCR

規(guī)格：50T

技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在00 mg 左右的植物種子（約/4 黃豆大�。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌�形狀）的植物葉片直接加到新鮮配制的0. mL溶液A 中，95℃保溫0-5 分鐘，加入0. mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的/0）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

技術(shù)特點(diǎn)：
準(zhǔn)確可靠，臨床雙盲對(duì)照試驗(yàn)＞000例，結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序法比對(duì)，結(jié)果*性大于99%。
2高靈敏：可檢測(cè)低至0ng的人基因組DNA。
3快速：整個(gè)檢測(cè)流程只需3小時(shí)。
4簡(jiǎn)便：試劑盒提供預(yù)混好的試劑，使體系配置操作簡(jiǎn)便。
5防污染
6產(chǎn)品僅用于科研高特異性：雙重特異性組成，保證檢測(cè)結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性引物與DNA互補(bǔ)鏈結(jié)合必需完全配對(duì)，才能延伸。探針特異性與所檢測(cè)基因的PCR產(chǎn)物配對(duì)，在延伸中產(chǎn)生熒光。

產(chǎn)品及特點(diǎn)：
. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。
2. 根據(jù)伴放線放線桿菌保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 產(chǎn)品僅用于科研本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。

注意事項(xiàng)：   
草魚(yú)呼腸孤病毒3型PCR檢測(cè)試劑盒
使用本試劑前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)全文。
2 操作時(shí)應(yīng)盡量少說(shuō)話，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染，而造成假陽(yáng)性；整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中，反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行，以避免交叉污染。
3 實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻（混勻時(shí)禁止激烈振蕩，只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻）。
4 反應(yīng)管中加好所有的試劑后，應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，以免形成過(guò)多的二聚體。
5細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會(huì)影響本品的檢測(cè)結(jié)果。如果用戶需要進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度，建議細(xì)胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進(jìn)行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測(cè)。

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=0-2g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=0-6g)水平。能從00萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板�？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
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運(yùn)輸及保存：
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、0×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見(jiàn)使用方法）。