高靈敏度DNA和RNA定量試劑測定與UV吸收率測定方法的效果對比

DNA編碼所有遺傳信息，是創(chuàng)造所有生物生命的藍(lán)圖。它充當(dāng)遺傳物質(zhì)在世代之間傳遞的存儲(chǔ)設(shè)備，RNA充當(dāng)DNA中存儲(chǔ)的藍(lán)圖的讀取器。儲(chǔ)存在DNA中的遺傳信息由RNA攜帶，在核糖體形成蛋白質(zhì)的過程中充當(dāng)信使。這整個(gè)過程稱為分子生物學(xué)的“中心教條”。由于核酸分析的范圍繼續(xù)擴(kuò)大，在核酸檢測方法的選擇上也是五花八門。影響檢測方法選擇的關(guān)鍵因素包括穩(wěn)定性、靈敏度、速度和方便性，以及檢測試劑和檢測系統(tǒng)的總成本。核酸超靈敏分析的原因包括單細(xì)胞和稀有細(xì)胞的遺傳物質(zhì)分析，如母體循環(huán)中的滋養(yǎng)細(xì)胞，以及單拷貝基因檢測。此外，更好的檢測方法可以提供一種需要較少擴(kuò)增周期的分析途徑，或者消除核酸擴(kuò)增反應(yīng)的多周期方案（例如，PCR）。盡管許多檢測技術(shù)，如基于化學(xué)發(fā)光的檢測技術(shù)，在未來可能會(huì)發(fā)揮重要作用，但目前熒光技術(shù)仍然是核酸分析中應(yīng)用最廣泛的檢測技術(shù)。

DNA和RNA定量試劑

Helixyte 綠色dsDNA定量試劑（Cat#17597）和StrandBrite 綠色RNA定量試劑（Cat#17611）分別對雙鏈DNA和單鏈RNA進(jìn)行了優(yōu)化。它們對核酸有很高的親和力，對結(jié)合核酸有極大的熒光增強(qiáng)作用，使得在幾分鐘內(nèi)直接檢測復(fù)雜溶液中微量核酸成為可能，而且一般不會(huì)受到其他生物分子的干擾。

圖1.小牛胸腺DNA中使用Helixyte 綠色和PicoGreen進(jìn)行DNA定量。由圖看出Helixyte 綠色和PicoGreen  具有幾乎相同的性能。

Helixyte Green是一種出色的核酸定量試劑，與dsDNA結(jié)合后可顯著增強(qiáng)熒光。它具有與PicoGreen®相同的光譜特性，因此是PicoGreen®的絕佳替代品（PicoGreen®是Invitrogen的商標(biāo)）。它是可用于定量溶液中DNA的最敏感的染色劑之一。使用Helixyte Green，您可以在ssDNA，RNA和游離核苷酸存在的情況下選擇性地檢測低至25 pg / ml的dsDNA。該測定法在三個(gè)數(shù)量級上是線性的，并且?guī)缀鯖]有序列依賴性，使您能夠準(zhǔn)確地測量來自多種來源的DNA，包括基因組DNA，病毒DNA，微量制備DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

在進(jìn)行Northern雜交分析、S1核酸酶分析、RNase保護(hù)分析、cDNA文庫制備、反轉(zhuǎn)錄PCR之前，檢測和定量少量RNA對于多種分子生物學(xué)過程非常重要，例如測量體外轉(zhuǎn)錄RNA的產(chǎn)量和測量RNA濃度。測量核酸濃度最常用的技術(shù)是在260nm處測定吸光度，吸光度法的主要缺點(diǎn)是蛋白質(zhì)、游離核苷酸和其他紫外線吸收化合物的干擾，但使用敏感的熒光核酸試劑可以緩解這種干擾問題。StrandBrite RNA定量試劑是一種用于溶液中RNA定量的超靈敏熒光核酸染料。StrandBrite RNA定量試劑可以用熒光酶標(biāo)儀或熒光分析儀檢測到低至5ng/mL的RNA。

Helixyte 綠色 dsDNA和StrandBrite 綠色 RNA定量試劑的優(yōu)勢：

• 高靈敏度：Helixyte 綠色和StrandBrite 綠色的靈敏度比UV吸收率測定法高10,000倍。
• 選擇性高：與紫外吸收的測量不同，這些檢測不受蛋白質(zhì)，游離核苷酸或非常短的寡核苷酸的影響，從而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在復(fù)雜混合物（例如血清或全血）中更加準(zhǔn)確。
• 操作簡單：這些檢測方法非常簡單，不需要分離步驟，因此非常適合自動(dòng)化，高通量篩選。
• 檢測范圍廣：對于Helixyte 綠色的檢測，定量在四個(gè)數(shù)量級內(nèi)都是準(zhǔn)確的。基于StrandBrite 的熒光檢測在三個(gè)數(shù)量級上都是準(zhǔn)確的。

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