鴨肝炎病毒1型PCR檢測試劑盒使用說明書

產品名稱：11鴨肝炎病毒1型PCR檢測試劑盒
英文名稱：Duck Hepatitis Virus 1(DHV1)1RTPCR
編號：YS30941-R

需要自備的器材：
1．11鴨肝炎病毒1型PCR檢測試劑盒儀器：分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 專用反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點:
1.11鴨肝炎病毒1型PCR檢測試劑盒反應時間最短為16分鐘,是目前反應時間最短的鱟試劑。
2.不依賴凝固蛋白形成凝膠,抗干擾能力強,特別適用于生物制品(蛋白、疫苗等)的內毒素檢測。
3.不需要特殊的檢測儀器就能準確定量。
4.配套偶氮化染色劑,可以避開有色檢品自身顏色對鱟實驗的干擾。
組成及試劑配制:

1、酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
11鴨肝炎病毒1型PCR檢測試劑盒技術特點：
1準確可靠，臨床雙盲對照試驗＞1000例，結果與金標準測序法比對，結果一致性大于99%。
2高靈敏：可檢測低至10ng的人基因組DNA。
3快速：整個檢測流程只需3小時。
4簡便：試劑盒提供預混好的試劑，使體系配置操作簡便。
5防污染
6高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結合必需完全配對，才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產物配對，在延伸中產生熒光。使用及效果:
在無內毒素試管中,加入100 uL細菌內毒素檢查用水、內毒素標準溶液,或待測樣品。再加入100 uL鱟試劑溶液,混勻,37ºC溫育T1分鐘。溫育結束,加入100 uL顯色基質溶液,混勻,37ºC溫育T2分鐘。溫育結束,加入500 uL偶氮化試劑1溶液,混勻,加入500uL偶氮化試劑2溶液,混勻加入500 uL偶氮化試劑3溶液,混勻,靜置5分鐘,于545nm波長處讀取吸光度值。
內毒素標準范圍(EU/mL)為0.01-0.1,T1為60分鐘,T2為6分鐘；內毒素標準范圍(EU/mL)為0.1-1,T1為10分鐘,T2為6分鐘。
運輸及保存:
常溫運輸,4℃避光保存,有效期年。