ZDNA結(jié)合蛋白1檢測試劑盒檢測未知抗體的間接法步驟

ZDNA結(jié)合蛋白1檢測試劑盒檢測未知抗體的間接法：
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。
 
2.次日洗滌3次。
 
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,最后一遍用DDW洗滌。
 
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
 
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
雙抗原夾心法的簡要操作步驟為：
1）先加入抗原，使抗體固定結(jié)合于載體表面；
2）再加樣品，使目標(biāo)檢測抗體形成抗原-抗體復(fù)合物；     美洲四棱線蟲PCR試劑盒
3）加酶標(biāo)抗原；
4）加入酶促反應(yīng)底物，發(fā)生顯色反應(yīng)，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。