其它動物細(xì)胞株操作步驟與注意事項(xiàng)

其它動物細(xì)胞株注意事項(xiàng)： 

（1）欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長良好（logphase）且存活率高之狀態(tài)，約為80–90％致密度。 

（2）冷凍前檢測細(xì)胞是否仍保有其特有性質(zhì)，例如hybridoma應(yīng)在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產(chǎn)生。

（3）注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級等級，無菌且無色（以0.22micron　FGLP　Telflon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650），以5～10ml小體積分裝，4℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性。 

其它動物細(xì)胞株操作步驟為：

 （1）選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，在凍存前一天蕞好換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心（1000r/min，10分鐘）。

 （2）去上清液，加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于4℃預(yù)冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為3×106～1×107/mL之間。

 （3）將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)Ｓ美鋬鏊芰瞎苤�，安瓿裝1～1.5mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期，同時(shí)作好登記（日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù)）。

 （4）將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi)；置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入4℃冰箱中2～3小時(shí)，再移至冰箱冷凍室內(nèi)3～4小時(shí)（此步可省略），再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí)，蕞后沉入液氮中。