臺盼藍、AO/PI熒光計數、明場計數染色法區(qū)別及所適用細胞樣品類型
在細胞實驗中，細胞濃度、活率的檢測是最基礎的一步，不同類型的細胞適用不同的染色方法。
最常見的計數方法是臺盼藍染色原理，這種跨膜染料通過觀察活死細胞形態(tài)來判斷細胞活率，中心透亮未著色的為活細胞，被著色呈現實心的為死細胞。近年來隨著細胞治療行業(yè)的進步，臺盼藍染色原理已經不能滿足復雜的細胞樣品的計數，比如原代細胞中的碎片、PBMC中殘留的紅細胞血小板等雜質碎片、培養(yǎng)后期的細胞，尤其在干細胞、CAR-T、NK等細胞治療領域臺盼藍計數方法的缺陷尤為突出。
隨之衍生出的AO/PI熒光計數方法（前幾期有普及過），采用核酸特異性標記原理，AO（吖啶橙，小分子染料，488激發(fā)，525發(fā)射）標記細胞核酸發(fā)綠色熒光，PI（碘化丙啶，大分子染料，535激發(fā)，600發(fā)射）標記死細胞核酸發(fā)紅色熒光，根據活死細胞熒光不同直接排除雜質碎片的干擾，彌補了臺盼藍的不足。AO/PI熒光計數方法在干細胞、CAR-T、NK等細胞治療領域廣受科研工作者的喜愛。
面對這種細胞我們Rigel除了臺盼藍活率計數、AO/PI熒光計數法，還有第三種計數方法，細胞計數—明場計數法，這種方法針對只需要檢測細胞的生長濃度，不需要檢測活率的實驗，對于上述提到的紙片微載體培養(yǎng)后裂解的細胞，不需要染色液直接細胞樣品上樣即可實現細胞濃度計數。
不同的細胞類型有不同的檢測方法，我們Countstar Rigel熒光細胞分析儀同時提供明場細胞計數、臺盼藍活率計數、AO/PI熒光法計數這三種方法，配備CCD高清攝像頭，獲取細胞真實的濃度，滿足細胞實驗檢測需求。
最常見的計數方法是臺盼藍染色原理，這種跨膜染料通過觀察活死細胞形態(tài)來判斷細胞活率，中心透亮未著色的為活細胞，被著色呈現實心的為死細胞。近年來隨著細胞治療行業(yè)的進步，臺盼藍染色原理已經不能滿足復雜的細胞樣品的計數，比如原代細胞中的碎片、PBMC中殘留的紅細胞血小板等雜質碎片、培養(yǎng)后期的細胞，尤其在干細胞、CAR-T、NK等細胞治療領域臺盼藍計數方法的缺陷尤為突出。
圖1 臺盼藍染色原理檢測不同階段的細胞
隨之衍生出的AO/PI熒光計數方法（前幾期有普及過），采用核酸特異性標記原理，AO（吖啶橙，小分子染料，488激發(fā)，525發(fā)射）標記細胞核酸發(fā)綠色熒光，PI（碘化丙啶，大分子染料，535激發(fā)，600發(fā)射）標記死細胞核酸發(fā)紅色熒光，根據活死細胞熒光不同直接排除雜質碎片的干擾，彌補了臺盼藍的不足。AO/PI熒光計數方法在干細胞、CAR-T、NK等細胞治療領域廣受科研工作者的喜愛。
圖2 臺盼藍和AO/PI熒光方法檢測不同階段的細胞
針對常規(guī)傳代培養(yǎng)的細胞和比較復雜的細胞都有了相應的計數方法，幫助我們準確分析細胞的濃度、活率、平均直徑等等，還有一類細胞是需要借助紙片微載體培養(yǎng)的，這類細胞的生長成球狀，很難實現在線計數，需要借助專門的裂解液，使細胞裂解后得到裸核，通過檢測裸核實現細胞濃度的檢測，但是這種裂解液對臺盼藍和熒光試劑均有影響，會使臺盼藍團成絮狀物，使AO/PI的熒光發(fā)生猝滅，這種細胞的裸核計數用最經典的臺盼藍和AO/PI熒光方法均無法實現。
圖3 裂解后的裸核臺盼藍染色視野和AO/PI熒光染色視野
面對這種細胞我們Rigel除了臺盼藍活率計數、AO/PI熒光計數法，還有第三種計數方法，細胞計數—明場計數法，這種方法針對只需要檢測細胞的生長濃度，不需要檢測活率的實驗，對于上述提到的紙片微載體培養(yǎng)后裂解的細胞，不需要染色液直接細胞樣品上樣即可實現細胞濃度計數。
圖4 細胞裂解后裸核的檢測
不同的細胞類型有不同的檢測方法，我們Countstar Rigel熒光細胞分析儀同時提供明場細胞計數、臺盼藍活率計數、AO/PI熒光法計數這三種方法，配備CCD高清攝像頭，獲取細胞真實的濃度，滿足細胞實驗檢測需求。
