三種神經(jīng)干細(xì)胞（NSC）的鑒定方法

神經(jīng)干細(xì)胞（NSC）是多能干細(xì)胞，可以分化為神經(jīng)系統(tǒng)的多種細(xì)胞，包括神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞等等。神經(jīng)干細(xì)胞可以從哺乳動物大腦的不同區(qū)域和脊髓等神經(jīng)系統(tǒng)中分離出來，具有重建神經(jīng)環(huán)路、修復(fù)神經(jīng)組織等能力，因此，神經(jīng)干細(xì)胞在神經(jīng)退行性疾病動物模型、遺傳性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、中風(fēng)和脊髓損傷等方面有著廣泛的研究價值。

那么，當(dāng)我們從神經(jīng)組織中分離出原代細(xì)胞，并進行純化后，如何鑒定其中的細(xì)胞就是神經(jīng)干細(xì)胞呢？無獨有偶，神經(jīng)干細(xì)胞也可以從形態(tài)學(xué)特征、特異性抗原表達和分化潛能三方面進行判斷。
 

1. 形態(tài)學(xué)特征

神經(jīng)干細(xì)胞可做懸浮培養(yǎng)，在生長過程中細(xì)胞呈聚球生長。從細(xì)胞形態(tài)來看，細(xì)胞團無或有較短的突起，形態(tài)上與其他種類的細(xì)胞沒有明顯的差異。當(dāng)然，神經(jīng)干細(xì)胞也可進行貼壁培養(yǎng)。
 

神經(jīng)干細(xì)胞懸浮培養(yǎng)
 

2. 特異性抗原表達

特異性抗原表達是神經(jīng)干細(xì)胞鑒定中的一項重要指標(biāo)，可以利用免疫熒光檢測對其分子標(biāo)志物進行驗證。例如，巢蛋白（Nestin）的表達被視為神經(jīng)干細(xì)胞最具代表性的標(biāo)志物，它在神經(jīng)胚胎形成時開始表達，隨著神經(jīng)干細(xì)胞的遷移和分化的完成，表達量逐漸下降甚至完全停止。

β3-Tubulin是神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)蛋白，作為神經(jīng)元標(biāo)志物，β3-Tubulin陽性是鑒定神經(jīng)元的必要條件。GFAP是星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，少突膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物是GalC或OSP。

神經(jīng)干細(xì)胞特異性抗原表達鑒定的一般標(biāo)準(zhǔn)為：

★ Nestin 陽性表達率≥75%；

★ β3-Tubulin陽性表達率 ≤10%；

★ GFAP陽性表達率≤10%；

★ GalC或OSP陽性表達率≤10%。

神經(jīng)干細(xì)胞免疫熒光染色鑒定
 

Nestin染色陽性，GFAP、Tubulin染色陰性，表明該細(xì)胞為神經(jīng)干細(xì)胞。

3. 分化潛能

神經(jīng)干細(xì)胞具有良好的分化潛能，能向神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等自發(fā)分化或誘導(dǎo)分化。

①  自發(fā)分化
神經(jīng)干細(xì)胞在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)大概7天，會自發(fā)分化為神經(jīng)元細(xì)胞 （16±7%）、 星形膠質(zhì)細(xì)胞 （75±7%） 、少突膠質(zhì)細(xì)胞（5±3%），此時可表達β3-Tubulin、GFAP、GalC或OSP標(biāo)志物。如GFAP高表達而Nestin低表達，則可判定該細(xì)胞為星形膠質(zhì)細(xì)胞。

②  誘導(dǎo)分化
除了自發(fā)分化，神經(jīng)干細(xì)胞可在特定培養(yǎng)條件下向誘導(dǎo)方向分化，如神經(jīng)元方向分化、少突膠質(zhì)細(xì)胞分化。用誘導(dǎo)液誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞成神經(jīng)元方向分化，可使分化比例升至60%以上。一旦神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞，Nestin便停止表達。

神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化免疫熒光染色鑒定

GFAP染色陽性，Hochest復(fù)染細(xì)胞核陽性，2組染色結(jié)果表明該細(xì)胞誘導(dǎo)后為星形膠質(zhì)細(xì)胞。

Tubulin染色陽性，Hochest復(fù)染細(xì)胞核陽性，2組染色結(jié)果表明該細(xì)胞誘導(dǎo)后為神經(jīng)元細(xì)胞。

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