解讀2017國(guó)家衛(wèi)計(jì)委感染性疾病相關(guān)個(gè)體化醫(yī)學(xué)分子檢測(cè)技術(shù)指南

為進(jìn)一步提高感染性疾病相關(guān)個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)，2017年12月1日，國(guó)家衛(wèi)計(jì)委發(fā)布了最新版的感染性疾病相關(guān)個(gè)體化醫(yī)學(xué)分子檢測(cè)技術(shù)指南。新版的感染性疾病個(gè)體化醫(yī)學(xué)分子檢測(cè)技術(shù)指南更側(cè)重在分子診斷層面，涉及到標(biāo)本的采集，運(yùn)輸，保存，實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)，分子診斷方法介紹，試劑的選擇，設(shè)備的維護(hù)和校準(zhǔn)，質(zhì)控品，結(jié)果報(bào)告，醫(yī)患溝通等全過(guò)程，給現(xiàn)今如火如荼的分子診斷檢測(cè)有一定的標(biāo)桿作用，是行業(yè)的重要參考，有諸多的更新點(diǎn)。

乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、結(jié)核分枝桿菌和人類(lèi)免疫缺陷病毒是目前個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)開(kāi)展最廣泛的病原體，分子檢測(cè)主要包括病毒載量、耐藥檢測(cè)、基因型分型和相關(guān)人類(lèi)基因多態(tài)性等。其中乙型肝炎病毒感染的分子診斷要點(diǎn)如下：

要點(diǎn)一：HBV DNA定量檢測(cè)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是目前HBV DNA載量檢測(cè)的主要方法，具有較高的靈敏度和較廣的線性范圍。核苷類(lèi)似物治療患者：在治療12周時(shí)檢測(cè)HBV DNA水平以確定發(fā)生病毒性應(yīng)答，之后每12-24周監(jiān)測(cè)1次。

要點(diǎn)二：HBV基因突變與耐藥

⑴ 與拉米夫定耐藥相關(guān)的變異：

拉米夫定與HBV DNA多聚酶YMDD序列結(jié)合，起到抑制病毒復(fù)制、降低HBV DNA水平的作用。HBV對(duì)拉米夫定最常見(jiàn)的耐藥變異就是YMDD變異。病毒出現(xiàn)變異耐藥后，應(yīng)根據(jù)患者的個(gè)體情況改用其它抗病毒藥物治療，如干擾素及其它核苷類(lèi)藥物。

⑵ 與阿德福韋酯耐藥相關(guān)的變異：

在長(zhǎng)期接受阿德福韋酯治療的病例中發(fā)現(xiàn)的耐藥變異為N236T或A181V，但其發(fā)生率很低。所有拉米夫定耐藥株對(duì)阿德福韋酯均敏感，而阿德福韋酯耐藥株對(duì)拉米夫定也敏感。

(3) 與恩替卡韋耐藥相關(guān)的變異：

恩替卡韋可抑制拉米夫定耐藥病毒株的復(fù)制，但拉米夫定耐藥株對(duì)恩替卡韋敏感性低于野毒株，并且容易發(fā)生對(duì)恩替卡韋的耐藥。目前研究結(jié)果顯示，產(chǎn)生恩替卡韋耐藥性的先決條件是需要有拉米夫定耐藥變異。在拉米夫定耐藥變異株上，I169T、184A/G/I/S、S202G/I或M250V變異的出現(xiàn)，可形成對(duì)恩替卡韋的耐藥性。

⑷ 與替比夫定耐藥相關(guān)的變異：

替比夫定的耐藥屏障低，在基線病毒水平高和治療24周后仍能檢測(cè)到病毒的患者中，病毒耐藥發(fā)生率高。

要點(diǎn)三：常用的檢測(cè)方法

✔序列分析（測(cè)序法）DNA序列分析是檢測(cè)基因突變最直接可信的方法，是所有其他檢測(cè)變異技術(shù)的基礎(chǔ)。

DNA序列分析（Sanger測(cè)序）測(cè)序原理非�？茖W(xué)，過(guò)程縝密，結(jié)果真實(shí)可視，準(zhǔn)確率達(dá)99.99%，不需要建庫(kù)，屬于直接測(cè)序，直接讀取數(shù)據(jù)，連續(xù)讀取目標(biāo)片段，而不是針對(duì)某個(gè)位點(diǎn)，不需要推導(dǎo)結(jié)論，數(shù)據(jù)充分可信，是分子診斷領(lǐng)域的金標(biāo)準(zhǔn)。

✔實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，能計(jì)算突變株比例，是檢測(cè)慢性乙肝患者拉米夫定耐藥的有效手段。

✔微陣列技術(shù)，一種高通量的檢測(cè)新技術(shù)，具有大通量、快速、靈敏的優(yōu)勢(shì)，但有一定的假陽(yáng)性和假陰性率，不能檢測(cè)出新位點(diǎn)的變異。

✔其他如質(zhì)譜技術(shù)，也可檢測(cè)目前我國(guó)臨床使用核苷酸藥物耐藥。

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乙肝病毒耐藥和分型檢測(cè)（Sanger測(cè)序法）
 

• 檢測(cè)常見(jiàn)的YMDD突變M204V/I，也可以同時(shí)獲得RT逆轉(zhuǎn)錄區(qū)的其他多個(gè)耐藥突變位點(diǎn)，包括有文獻(xiàn)支持的A181V/T，N236T，I169T，L180M，T184A/G/S/I/L/F，S202G/I，M250V/L/I，V173L，A194T，對(duì)未知耐藥位點(diǎn)和發(fā)生變異的病毒有很好的臨床和科研參考價(jià)值
• 檢測(cè)六種主要乙肝藥物（拉米夫定，替比夫定，恩替卡韋，恩曲他濱，阿德福韋和替諾福韋）的耐藥以及乙肝病毒分型信息
• 分子診斷技術(shù)金標(biāo)準(zhǔn)，耐藥和分型一步到位
• 國(guó)內(nèi)唯一獲得CFDA的Sanger測(cè)序法的乙肝耐藥分析檢測(cè)
• CFDA注冊(cè)證：國(guó)食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2014第3401444號(hào)