破壁機在胞內(nèi)分枝桿菌破壁制備上的應用

引言：分枝桿菌屬（ Mycobacterium）是一類細長略彎曲的桿菌，因有分枝生長的趨勢而得名。細胞壁含有大量脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，一般不易著色，若經(jīng)加溫或延長染色時間而著色后能抵抗強脫色劑鹽酸乙醇的脫色，故又稱抗酸桿菌，且不易破壁。本次實驗ATS破壁機將樣品做兩部分處理，對比破壁結果。

實驗對象 
胞內(nèi)分枝桿菌

實驗儀器
高速離心機
ATS破壁機
顯微鏡

實驗背景
分枝桿菌屬（ Mycobacterium）是一類細長略彎曲的桿菌，因有分枝生長的趨勢而得名。本菌屬的顯著特性為：①細胞壁含有大量脂質(zhì)；②無鞭毛、無芽胞，也不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素；③對人致病的主要有結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、麻風分枝桿菌；④所致感染多為慢性過程，長期遷延并有破壞性的組織病變。

實驗難點
細胞壁含有大量脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，一般不易著色，若經(jīng)加溫或延長染色時間而著色后能抵抗強脫色劑鹽酸乙醇的脫色，故又稱抗酸桿菌，且不易破壁。

實驗目的
將胞內(nèi)分枝桿菌進行破壁，后續(xù)提取蛋白。

實驗工藝
1.預處理：將滅活后的胞內(nèi)分枝桿菌液體（非結核)分為兩部分，一部分不作處理；一部分做堿處理，離心后去上清加水再重懸。
2.實驗工藝：ATS破壁機搭配一級模塊后，控低溫處理。

實驗結果
A.未處理的菌液破壁結果
通過對菌液進行抗酸染色后觀察，破壁前菌液呈紫色，在破壁次數(shù)相同的條件下，隨著壓力的增高，胞內(nèi)分枝桿菌顏色偏向藍色。
 

100倍油鏡顯示，壓力越高，破壁效果越好。（壓力排序：A＜B＜C＜D）

破壁前

破壁后

B.堿處理菌液破壁結果
同壓力同次數(shù)下，堿處理后的菌液破壁效果明顯提高。

           （堿處理）                                              （未處理）