細胞小室在細胞遷移能力測試中的應(yīng)用

什么是細胞遷移能力？

細胞遷移是最古老也是最重要的動物細胞生理活動之一，看似簡單的一個動作實際上是高度動態(tài)和協(xié)調(diào)的復(fù)雜過程，包括胞外信號誘導(dǎo)、微絲系統(tǒng)提供動力、整合素介導(dǎo)的黏附結(jié)構(gòu)提供附著力等。

細胞跨出的每一小步，是機體化學(xué)調(diào)控的一大步，在胚胎發(fā)育、組織形成、免疫活動、損傷修復(fù)等生理過程，以及炎癥、癌癥轉(zhuǎn)移等病理過程中都有著極其重要的作用。

因此拒絕細胞“拖延癥”，密切關(guān)注細胞遷移能力，成為細胞診斷的必修課！

什么是細胞小室？
 

 

細胞小室在細胞實驗中很常用。這是一類有通透性的杯狀的裝置，可以認為這是一種膜濾器，也可認為是一種有通透性的支架。
 

 

上室底部的薄膜是整個實驗裝置的核心部分，需要具有通透性、可觀察性、高化學(xué)兼容性。

NEST選用具有全面化學(xué)適用性的聚酯膜及聚碳酯膜，通過TC處理后便于細胞貼壁培養(yǎng)。

聚碳酸酯膜（PC）

膜孔密度較高，允許通過膜完成更多交換，而且具有優(yōu)秀的細胞粘附特性，所以適用于轉(zhuǎn)運研究和其他需要實現(xiàn)最佳細胞生長的應(yīng)用。

另外PC膜也非常適用于屏障分析。在較長時段內(nèi)相比其他膜材料，具有更高、更持續(xù)且更穩(wěn)定的跨上皮電阻 (TEER) 值。PC膜無需基質(zhì)包被即可培養(yǎng)大多數(shù)類型細胞。

 聚脂膜（PET）

PET膜孔密度較低，具有更好的光學(xué)清晰度，有利于顯微鏡細胞觀察以及細胞成像。

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待測細胞的直徑?jīng)Q定了薄膜孔徑的選擇。通常情況下，薄膜的孔徑應(yīng)略小于細胞的直徑以防止細胞直接漏入到下室。

NEST提供多種規(guī)格孔徑，滿足共培養(yǎng)實驗、趨化實驗、細胞遷移實驗、細胞侵襲以及藥物轉(zhuǎn)運多種需求。
 

小于 3μm 孔徑的小室，細胞不會遷移通過。涉及到細胞遷移的實驗，要用 5.0、8.0μm的小室，這樣上室細胞可穿過聚碳酸酯膜進入下室。
 

鑒定方式

1）首先，細胞處理∶處于對數(shù)生長期的細胞，消化細胞，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1-2遍，用無血清培養(yǎng)基重懸。

2）鋪板∶24孔板下加入600ul含10%FBS的培養(yǎng)基，取細胞懸液150μl加入細胞小室，每孔，10000個細胞。

3）細胞培養(yǎng)∶37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20~24h。

4）固定∶取出細胞小室，棄去孔中培養(yǎng)液、用無鈣的PBS洗2遍，4%多聚甲醛固定30分鐘甚至過夜。

5）染色∶0.1%結(jié)晶紫染色20 min，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細胞，用PBS洗3遍。

6）顯微鏡下計數(shù)。
 

 

注意事項

1.細胞計數(shù)時一定要盡量嚴格，以保證各孔細胞密度均勻。為了避免各孔間由于細胞計數(shù)引入的誤差，一般需要重復(fù)三個副孔。 

2.種細胞時盡量從孔的中間位置滴加，力度柔和，速度盡量慢，以免沖擊力太大破壞膠面；

3.避免氣泡產(chǎn)生。注意小室底部氣泡的產(chǎn)生。小室在放入孔板時，常常會因為液體表面張力的原因在小室底部形成氣泡，氣泡導(dǎo)致的底部液面不均會嚴重影響細胞侵襲和遷移能力， 因此在放置小室時，應(yīng)輕柔勻速，若發(fā)現(xiàn)底部產(chǎn)生氣泡，不要拍打板子(這樣做會使剛鋪好的細胞重新聚團)，而應(yīng)將小室輕輕提起，重新放置直至無氣泡。

 

診斷報告
 

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