生物反應器在利用T細胞規(guī)�；�培養(yǎng)CAR-T細胞上的應用

近年來，隨著生物科學技術(shù)的不斷發(fā)展，細胞療法逐漸成為熱門話題， CAR T療法屬于細胞療法的一種，它是通過基因改造，準確制導的方式來抑制或殺死腫瘤細胞。 CAR T 細胞規(guī)模化培養(yǎng)主要是利用生物反應器進行體外培養(yǎng)，生物反應器培養(yǎng)技術(shù)通過對細胞的生長環(huán)境（比如：溫度、營養(yǎng)物質(zhì)、通氣量、產(chǎn)物、pH、機械要求和流速等）進行自動監(jiān)測與調(diào)控，從而實現(xiàn)細胞規(guī)�；�培養(yǎng)的生物技術(shù)過程。

什么是T細胞？T細胞培養(yǎng)的注意事項有哪些？
T細胞是人體免疫力的重要組成，它屬于淋巴細胞的一種，所以也被稱為T淋巴細胞。T細胞作為B細胞的輔助，在免疫系統(tǒng)中主要執(zhí)行的是分化為效應細胞來執(zhí)行細胞免疫的功能。

在 T 細胞的經(jīng)過轉(zhuǎn)接后，可以起到抑制腫瘤細胞生長的作用。CAR T 細胞改造主要是通過從腫瘤活檢中分離 TIL，進行清洗和濃縮，然后再通過生物反應器進行倍數(shù)擴增。所以，CAR T 細胞療法是基于 T 細胞受體 (TCR) 或嵌合抗原受體 (CAR) 的生物工程技術(shù)。通過這種方法，來自其他癌癥患者的正常 T 細胞通過單采分離并轉(zhuǎn)導以產(chǎn)生 TCR 或 CAR T 細胞。

在這種方法中需要注意以下幾點：
1.必須執(zhí)行激活程序以允許制造的T細胞的轉(zhuǎn)導和增殖。
T細胞激活和增殖的完整環(huán)境包括抗CD3抗體和外源性IL-2，以及作為培養(yǎng)細胞的外周血單核細胞。這種組合被也被稱為“快速擴展協(xié)議”（REP）。有些機構(gòu)也在嘗試用額外的培養(yǎng)基補體（IL-7、IL-15、抗CD28抗體）以及使用專注于pp65蛋白的肽混合物進行預刺激，從而進一步提升T細胞的增殖率。
2. 用于有效治療的T細胞亞群尚未確定。
在CAR-T細胞療法中，由于CD4+和CD8+T細胞常常是混在一起進行基因編輯的，所以CD4+和CD8+可以同樣被激活，并且具有細胞裂解相關(guān)活性。由于T細胞活化涉及許多因素。T細胞亞群難以確定。所以，任何涉及活化步驟的生物反應器都應評估其對T細胞與抗原呈遞相互作用的影響。例如，生物反應器的攪拌速率，PO值、PH值等都會影響到T細胞活化。這就對細胞培養(yǎng)系統(tǒng)的標準化及各項參數(shù)都提出了更為嚴格的要求。



生物反應器進行規(guī)模擴增的優(yōu)勢？
1.細胞擴增效率得以提升
生物反應器進行細胞培養(yǎng)主要目的在于：一方面是在單位體積內(nèi)提升動物細胞的有效培養(yǎng)密度，從而達到細胞增產(chǎn)的效果，來生產(chǎn)蛋白、抗體或載體;另一方面還可以創(chuàng)造類似于體內(nèi)環(huán)境的細胞增殖系統(tǒng)來培養(yǎng)稀缺的，增長緩慢的價值細胞。通過實踐，細胞生物反應器大規(guī)模細胞擴增的主要方式有貼壁培養(yǎng)、片狀載體培養(yǎng)和全懸浮培養(yǎng)。與搖瓶培養(yǎng)相比，生物反應器在細胞的擴增速度、細胞群的穩(wěn)定性、細胞成活率等方面都有著明顯的優(yōu)勢。目前已廣泛用于創(chuàng)新藥研發(fā)、基因藥物生產(chǎn)等領(lǐng)域。
2.可以節(jié)約生產(chǎn)成本和保證細胞質(zhì)量
由于細胞生物反應器可以提供細胞培養(yǎng)的穩(wěn)定環(huán)境，通過PID微電子控制系統(tǒng)，全程自動監(jiān)控影響細胞生長的各項因素，并及時生成數(shù)據(jù)化分析報告反饋并調(diào)整。
3.促進符合良好生產(chǎn)規(guī)范(GMP)的協(xié)議
由于當前T細胞擴增方案屬于高勞動強度，所以促進確保GMP的過程非常重要。生物反應器通過自動化及密閉設(shè)計從本質(zhì)上避免了細胞群在擴增期間暴露于外部環(huán)境所造成的污染，這樣的自動化、過程控制和完整的封閉系統(tǒng)也滿足和促進了GMP規(guī)范要求，培養(yǎng)系統(tǒng)采用電子簽名，均符合GMP審核要求。

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