細(xì)胞生長曲線繪制簡介

典型的生長曲線即可分為潛伏期、指數(shù)生長期、平頂期及退化衰老四個(gè)部分，其中的三個(gè)不同生長時(shí)期（潛伏期、指數(shù)生長期和平頂期）是每個(gè)細(xì)胞系所共有的特征。通過測定生長曲線,不僅可以了解培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)、測定細(xì)胞絕對生長數(shù)、判斷細(xì)胞活力，而且也可用于測定藥物等外來因素對細(xì)胞生長的影響。本實(shí)驗(yàn)采用計(jì)數(shù)法測定細(xì)胞生長曲線，通過連續(xù)對細(xì)胞計(jì)數(shù)（通常為10天，一般應(yīng)每次計(jì)數(shù)3孔細(xì)胞取平均值），然后以存活細(xì)胞數(shù)對培養(yǎng)時(shí)間作圖，即得該種細(xì)胞的生長曲線。
 

2.實(shí)驗(yàn)材料

①小鼠胚胎成纖維細(xì)胞或雞胚成纖維細(xì)胞,DMEM完全培養(yǎng)基。

②24孔板細(xì)胞培養(yǎng)板、吸管、吸球，超凈工作臺(tái)、倒置顯微鏡、細(xì)胞計(jì)數(shù)板。

①取生長狀態(tài)良好的小鼠胎兒成纖維細(xì)胞或雞胚成纖維細(xì)胞,用胰酶消化。

②用DMEM制備成細(xì)胞懸液。細(xì)胞計(jì)數(shù)后，將細(xì)胞濃度調(diào)整為(1~5)×104個(gè)/mL，精確地將細(xì)胞分別接種于兩塊24孔板中，要求每孔加入的細(xì)胞總數(shù)一致，加入的培養(yǎng)液量要一致。

③每天取3孔細(xì)胞消化，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算平均值。一般需連續(xù)計(jì)數(shù)10天左右。從培養(yǎng)起開始，每3天需給未計(jì)數(shù)的細(xì)胞換液。

④以培養(yǎng)時(shí)間為橫軸，細(xì)胞濃度為縱軸，將每天所得的細(xì)胞濃度標(biāo)在坐標(biāo)紙上，各點(diǎn)連線即得細(xì)胞生長曲線。

4.注意事項(xiàng)

① 細(xì)胞接種濃度不能過多也不能過少，在合適的濃度下細(xì)胞在7~10天內(nèi)能長滿而不發(fā)生生長抑制；細(xì)胞數(shù)量太少，細(xì)胞適應(yīng)期太長；數(shù)量太多，細(xì)胞將很快進(jìn)入增值穩(wěn)定期，在一段時(shí)間內(nèi)需進(jìn)行傳代，曲線不能準(zhǔn)確反映細(xì)胞生長情況。同種細(xì)胞的生長曲線先后測定要采用同一接種密度，這樣才能做縱向比較；不同的細(xì)胞也要接種細(xì)胞數(shù)相同，才能進(jìn)行比較。

② 細(xì)胞生長曲線是觀察細(xì)胞生長基本規(guī)律的重要方法。只有具備自身穩(wěn)定性生長特性的細(xì)胞才適合在觀察細(xì)胞生長變化的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用。因而在細(xì)胞系細(xì)胞和非建系細(xì)胞生長特性觀察中，生長曲線的測定是最為基本的指標(biāo)。

③ 細(xì)胞生長曲線雖然最為常用，但有時(shí)其反映數(shù)值不夠精確，有20% ~ 30%的誤差，需結(jié)合其他指標(biāo)進(jìn)行分析。在生長曲線上細(xì)胞數(shù)量增加1倍時(shí)間稱為細(xì)胞倍增時(shí)間，可以從曲線上換算出。細(xì)胞倍增的時(shí)間區(qū)間即為細(xì)胞對數(shù)生長期，細(xì)胞傳代、冷凍等實(shí)驗(yàn)多應(yīng)在此區(qū)間進(jìn)行。

④ 細(xì)胞在不同培養(yǎng)液中的細(xì)胞生長曲線和細(xì)胞倍增時(shí)間可以直接反映細(xì)胞在該種培養(yǎng)液內(nèi)的增殖速度，是對培養(yǎng)液進(jìn)行選擇的主要依據(jù)。通過個(gè)同培養(yǎng)液內(nèi)細(xì)胞生長曲線的差異，篩選出對成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞最適合的培養(yǎng)液。

⑤通過對細(xì)胞生長曲線的繪制，可比較不同的培養(yǎng)液對細(xì)胞生長曲線變化的影響。在條件允許的情況下，分析培養(yǎng)液中添加不同的生物活性物質(zhì)（如生長因子、激素等）對細(xì)胞生長的影響，從而篩選出合適的細(xì)胞培養(yǎng)液。

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