圖1. BLBS原理
進(jìn)一步,作者將BSLB上的tSV洗脫下來(lái),并利用NanoFCM對(duì)tSV和細(xì)胞上清獲得的EVs進(jìn)行綜合表征和對(duì)比。發(fā)現(xiàn)tSV顆粒大小在82.13± 0.75nm,而EVs的粒徑為65± 25nm,明顯小于tSV的粒徑大小。用NanoFCM的Exo粒徑標(biāo)準(zhǔn)品(含68, 91, 113, 155 nm四種尺寸的SiO2球),對(duì)EVs和tSV的粒徑進(jìn)行分群,發(fā)現(xiàn)與EVs相比,tSV中大于113nm和155nm的顆粒所占比例更高(圖2-d);tSV中TCR、CD40L、CD81陽(yáng)性的tSV顆粒粒徑顯著大于對(duì)應(yīng)的EVs陽(yáng)性的顆粒(圖2-e)。
圖2. tSV和EVs顆粒大小亞群分類
進(jìn)一步地,對(duì)tSV和EVs進(jìn)行CD81和TCRαβ雙標(biāo),發(fā)現(xiàn)tSV中兩種標(biāo)志物雙陽(yáng)的比例高于EVs,且TCR陽(yáng)性的tSV粒徑也顯著大于TCR陽(yáng)性的EVs(圖3)。后續(xù)作者研究發(fā)現(xiàn)不同種類的T細(xì)胞來(lái)源的tSV內(nèi)容物具有明顯區(qū)別;tSV比EV攜帶更多的RNA結(jié)合蛋白和特有的microRNA等,感興趣的讀者可以閱讀原文進(jìn)行了解?偟膩(lái)說(shuō)作者提出了珠狀脂質(zhì)雙分子層(BSLB)作為一種多功能的合成APCs來(lái)捕獲、表征和促進(jìn)對(duì)tSV生物發(fā)生的理解,開(kāi)發(fā)了一種免疫細(xì)胞間信息傳遞和交流研究的新方法。
圖3. tSV和EVs功能亞群分析
文章中利用NanoFCM對(duì)tSV和EVs的亞群進(jìn)行精細(xì)分類,根據(jù)顆粒的大小將tSV和EVs分成四個(gè)不同大小的亞群,通過(guò)抗體標(biāo)記,可對(duì)tSV和EVs 功能亞群進(jìn)一步精細(xì)研究。利用NanoFCM單顆粒水平和超高分辨率的優(yōu)勢(shì),可對(duì)tSV的不同亞群進(jìn)行精細(xì)分類和研究,有望加快研究者對(duì)tSV的精細(xì)化研究進(jìn)程!
參考文獻(xiàn)
Céspedes P F, Jainarayanan A, Fernández-Messina L, et al. T-cell trans-synaptic vesicles are distinct and carry greater effector content than constitutive extracellular vesicles[J]. Nature communications, 2022, 13(1): 3460.