組蛋白/DNA 結(jié)合蛋白提取試劑盒
組蛋白/DNA 結(jié)合蛋白提取試劑盒
目錄號:HP-014
描述：
組蛋白和其他 DNA 結(jié)合蛋白在染色體結(jié)構(gòu)，基因調(diào)控和翻譯后修飾中扮演著重要角色。組蛋白的核心部件可以通過甲基化，乙�；�，磷酸化和 SUMO 化修飾。這些修飾對于基因表達，調(diào)控，DNA 修復(fù)和染色體凝集至關(guān)重要。本試劑盒可以快速從培養(yǎng)的細胞和動物組織中分離的細胞中提取組蛋白和其他 DNA 結(jié)合蛋白。
不同于其他商業(yè)試劑盒采用酸或高鹽提取，只能選擇性的提取堿性蛋白，得率很難控制。本試劑盒采用完全不同的機制，有效的提取組蛋白和 DNA 結(jié)合蛋白，用于研究組蛋白內(nèi)部調(diào)控修飾。可以從 0.5-5x106 細胞中提取組蛋白，得率可達 1-2.5mg/ml，操作時間小于 10 分鐘。
應(yīng)用：
可應(yīng)用于 SDS-PAGE，immunoblottings，ELISA，IP，蛋白定位和蛋白修飾研究。
緩沖液配方：非公開
試劑盒組分
50T: 4T:
1. 25ml Buffer A 1. 2.0ml Buffer A
2. 25ml Buffer B 2. 1.5ml Buffer B
3. 50 個離心管柱 3. 4 個離心管柱
4. 50 個收集管 4. 4 個收集管
儲存及運輸：常溫運輸，室溫儲存。
所需附加材料
1XPBS 渦旋震蕩儀 臺式離心機 BCA 蛋白定量試劑盒
重要產(chǎn)品信息
注意：如果 BufferB 在低溫環(huán)境儲存出現(xiàn)沉淀，可以 37 度孵育至沉淀完全溶解。
操作方法：
表格 1，不同細胞起始數(shù)量加入相應(yīng)體積 Buffer B
常見問題
重要產(chǎn)品信息
蛋白酶抑制劑可根據(jù)實驗選擇是否加入，如果下游實驗需要較長時間或者蛋白提取后保存較長時間，建議在裂解液中添加蛋白酶抑制劑。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑應(yīng)在使用前加入緩沖液 A 中。（各類抑制劑的添加方法請按照抑制劑母液比例，例如母液是 100x，添加時按照 1：100添加，即 1ml 緩沖液中添加 10ul 抑制劑）。推薦使用 BCA 試劑盒用于蛋白濃度測定。
注意：如果 BufferB 在低溫環(huán)境儲存出現(xiàn)沉淀，可以 37 度孵育至沉淀完全溶解。
操作方法：
1.將 Buffer A 和離心管柱和接收管套管放置于冰上預(yù)冷。低速離心（
500-600Xg ，5 分鐘）收集
0.5-5x106 個培養(yǎng)細胞或從組織中分離出的細胞。推薦使用 Minute TM單細胞分離試劑盒（目錄號
SC-012，Invent biotechnologies，MN）從動物組織中獲取單細胞。
2.加入 1ml 預(yù)冷的 PBS 重懸細胞，將細胞混懸液轉(zhuǎn)入一個 2.0ml 離心管中。700Xg，離心 2 分
鐘，沉淀細胞，將上清液完全棄去。
3.加入 0.5ml Buffer A 重懸細胞，冰上孵育 5 分鐘。渦旋震蕩幾下后，14,000Xg，離心 2 分鐘。
棄去上清液（此上清液為細胞胞漿蛋白）。（可選優(yōu)化：用 1.0ml 預(yù)冷的 PBS 清洗沉淀）。
4.加入適量的 Buffer B （如下表 1，根據(jù)細胞體積或細胞起始數(shù)量添加）到管中，渦旋震蕩 10秒鐘混勻，迅速轉(zhuǎn)入離心管柱套管中，蓋上蓋子，16,000Xg 離心 30 秒。棄掉離心管柱，收集管中的溶液即為組蛋白和 DNA 結(jié)合蛋白（通常濃度 1-2.5mg/ml）。如果提取的蛋白下游用于免疫沉淀實驗，請用 PBS-吐溫或其他適配緩沖液 1:3 稀釋蛋白溶液
表格 1，不同細胞起始數(shù)量加入相應(yīng)體積 Buffer B
細胞體積 （ul） 細胞數(shù)（百萬） Buffer B（ul）
5 0.5 25-50
10 1.0 50-100
20 2.0 100-150
50 5.0 250-300
常見問題
問題 解決方法
低蛋白濃度 增加細胞起始量或者減少 Buffer B 用量
離心管柱中有液體殘留 減少細胞起始數(shù)量或增加 Buffer B 用
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