厚壁微生物總蛋白提取試劑盒
M厚壁微生物總蛋白提取試劑盒
描述：
應(yīng)用：
試劑盒組分(50T):
運(yùn)輸與儲存：
所需附加材料
目錄號：YT-015
描述：
從厚壁微生物中提取蛋白質(zhì)是非常復(fù)雜和困難的，傳統(tǒng)方法提取時(shí)間長，需要機(jī)械研磨和有機(jī)溶劑。Minute厚壁微生物總蛋白提取試劑盒提供了一種無需儀器，快速可靠的從厚壁微生物中提取蛋白的方法。可以從酵母，絲狀真菌，革蘭氏陽性和陰性菌，蟲卵，微藻中等提取總蛋白。試劑盒同時(shí)提供優(yōu)化的變性裂解液和天然裂解液供選擇。與傳統(tǒng)方法比無需復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)條件，例如酵母蛋白提取時(shí)使用的 8M 尿素，機(jī)械研磨和反復(fù)煮沸等等。僅需單管操作，從酵母中可提取全范圍蛋白無丟失，在某些分子量范圍的蛋白質(zhì)更優(yōu)于其他方法。本試劑盒可用于對數(shù)期和靜止期微生物。整個(gè)操作時(shí)間小于 10 分鐘，得率可達(dá) 2-5 mg/ml。
應(yīng)用：
提取的蛋白可應(yīng)用于 SDS-PAGE、WB，IP，ELISA，酶活性檢測和蛋白質(zhì)組學(xué)分析。緩沖液可以兼容 IMAC樹脂用于 His-標(biāo)簽蛋白純化。
試劑盒組分(50T):
1. 20ml 變性緩沖液
2. 20ml 天然緩沖液
3. 5g 蛋白提取粉
4. 50 個(gè) 1.5ml 離心管
5. 2 根 1.5ml 塑料研磨棒
運(yùn)輸與儲存：
常溫運(yùn)輸，室溫儲存。
所需附加材料
臺式離心機(jī)（最大離心力 14,000-16,000Xg）
產(chǎn)品重要信息
操作方法：
產(chǎn)品重要信息
1.變性緩沖液含有表面活性劑和其他化學(xué)物質(zhì)，在低溫下（如在冰上）孵育可能會形成沉淀，因此，不建議在
冰上預(yù)冷。天然緩沖液可以預(yù)冷，不會形成沉淀。微生物沉淀可以在冰上孵育，步驟 1-3 在環(huán)境溫度下執(zhí)行。
如果擔(dān)心蛋白水解，建議在使用緩沖液之前添加蛋白酶抑制劑。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑應(yīng)在使用前
加入緩沖液。（請按照蛋白酶或磷酸酶抑制劑母液比例，例如母液是 100x，添加時(shí)按照 1：100 添加，1ml 緩
沖液中添加 10ul 抑制劑）。推薦使用 BCA 法測定蛋白濃度。
2.裂解液的選擇要根據(jù)下游實(shí)驗(yàn)來決定，變性裂解液適合用于 SDS-PAGE，WB 實(shí)驗(yàn)，天然裂解液適合用于
ELISA，IP，CO-IP 等實(shí)驗(yàn)。
3.使用變性裂解液提取的蛋白，做 WB 上樣前仍需和 loading buffer 混勻煮制樣品。
操作方法：
1.在試劑盒提供的 1.5ml 離心管中離心收集微生物樣品。確保樣品體積在 20-30ul 左右�？梢栽诹硪粋�(gè) 1.5ml離心管中加入 30ul 水比較體積估算。
2.加入 1ml 水，最高速度離心 2 分鐘清洗樣品，棄去上清液。秤取 80-90mg 蛋白提取粉加入管中（提取粉盡量不要接觸管壁：可通過一張折疊蠟紙中稱出粉末的重量，然后將粉末倒入管的底部避免）。加入 20ul 變性或天然緩沖液。（裂解液二選一：變性裂解液適合用于 SDS-PAGE，WB 實(shí)驗(yàn)，天然裂解液適合用于 ELISA，IP，CO-IP 等實(shí)驗(yàn)。）
3.用 1.5ml 研磨棒反復(fù)扭轉(zhuǎn)研磨 2 分鐘。再次補(bǔ)加 150-200ul 緩沖液（與第 2 步緩沖液相同），再次研磨約 30秒 (注意：研磨棒可以重復(fù)使用，在清洗劑中簡單浸泡后，用水沖洗并用紙巾擦干即可）。蓋上蓋子大力渦旋震蕩 10 秒鐘確保樣品混勻。
4.離心機(jī) 4℃，最高速離心 3-4 分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到新管中（此部分為總蛋白）。如果希望增加蛋白產(chǎn)量，可以重復(fù)步驟 3-4 一次。通常變性蛋白產(chǎn)量為 3-5mg/ml，天然蛋白產(chǎn)量為 2-3mg/ml。提取的蛋白可以儲存于-80oC 供將來使用。
應(yīng)用提示：最終的蛋白質(zhì)產(chǎn)量與步驟 3 中的研磨頻率和時(shí)間成正比。研磨杵僅與試劑盒提供的 1.5ml 離心管匹配使用。
標(biāo)簽：
厚壁微生物總蛋白提取試劑盒
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